一、酚液对瘤细胞的作用和毒性（论文文献综述）
唐晓倩[1]（2020）在《农产品典型真菌毒素生物识别材料与快速检测方法研究》文中认为真菌毒素危害大、防控难,威胁农产品质量安全。开展农产品真菌毒素现场快速检测技术研究,及时发现污染,是防止真菌毒素进入食物链的重要手段。目前快检技术主要面临的挑战表现在:部分真菌毒素高亲和力抗体匮乏、多种类风险因子同步检测难、速测产品抗干扰性差。针对上述问题,本学位论文研制出高灵敏高特异性单克隆抗体、纳米抗体,改良了核酸模拟抗体（适配体）等生物识别材料;并基于三种识别材料依次建立了系列真菌毒素快速检测技术,用于粮油、乳品、水果等不同农产品中典型真菌毒素的高灵敏检测。论文最后,系统分析了这三类主要识别材料的应用特性及在快检产品开发中应用前景。具体研究结果如下:（1）研制出伏马毒素B1（FB1）、二乙酰镳草镰刀菌烯醇（DAS）等系列单克隆抗体（mAb）,建立了粮油中FB1灰度成像、真菌毒素与农残同步侧向流层析,及基于新型纳米仿生催化材料的DAS免疫气压传感检测方法。（1）研制出FB1单克隆抗体7A11,半抑制浓度（IC50）为0.66 ng/mL。建立了两类结果输出方式的现场快速检测方法:基于纳米金比色定性方法与灰度成像定量方法,定量线性范围为0.24～15.0 ng/mL。可用于大米、玉米、花生、小麦等农产品中FB1检测,为粮油产品中FB1现场快速筛查提供了经济、快速、可定量的选择方案。（2）研制出甲萘威单克隆抗体1D2与克百威单克隆抗体G11,IC50值分别为0.80 ng/mL和127.6 ng/mL,特异性良好。针对农产品中不同种类小分子污染物并存的现状,以黄曲霉毒素、甲萘威和克百威为例,建立了时间分辨荧光免疫层析（TRFICA）同步快速分析方法。研究表明,该方法对黄曲霉毒素、甲萘威、克百威检测限依次为0.03、0.02、60.2 ng/mL,克服了真菌毒素与农药残留检测方法不同步、灵敏度低的难题。（3）研制出特异性DAS单克隆抗体5E7,亲和力常数Ka值达5.4×108,IC50值为3.08ng/mL;合成并表征了Au@PtNPs纳米颗粒及其与抗体标记探针,由此建立了免疫气压生物传感方法。研究结果表明,该方法检测限达0.46 ng/mL。攻克了DAS识别材料特异性差,缺乏灵敏、准确、便携现场快速筛查方法的技术瓶颈。（2）构建了噬菌体展示纳米抗体文库,研制出黄曲霉毒素M1（AFM1）抗独特型纳米抗体（AIdnb）;将纳米抗体用作替代抗原分别开发了牛奶中AFM1电化学检测方法和多种真菌毒素TRFICA同步检测方法。（1）研制的AFM1抗独特型纳米抗体VHH 4-1-1表征结果显示,其对AFM1的IC50值为8.54 ng/mL;采用重氮盐电接枝方法,将VHH 4-1-1修饰在丝网印刷碳电极表面;再采用计时电流法,建立了基于纳米抗体替代抗原的免疫竞争电化学传感方法。研究结果表明,所建立方法对牛奶中AFM1的检测限为0.18 ng/mL,检测范围为0.25～5.0 ng/mL,特异性良好。为食品安全检测领域提供了新型绿色检测方法。（2）为研究抗独特型纳米抗体在TRFICA上作为无毒替代抗原的可行性,采用黄曲霉毒素B1（AFB1）抗独特型纳米抗体phage 2-5和ZEN抗独特型纳米抗体phage 8#为核心识别材料,分别研究了固定化AIdnb的TRFICA竞争分析模式（AIdnb-TRFICA）和固定化mAb的TRFICA竞争分析模式（mAb-TRFICA）。比对两种竞争分析模式的结果表明,AIdnb-TRFICA的灵敏度较高,检测AFB1、ZEN的IC50值分别为0.46和0.86ng/mL,是mAb-TRFICA的18.3和20.3倍。由此采用AIdnb-TRFICA建立了同步检测方法,对AFB1、ZEN检测限达0.13 ng/mL和0.20 ng/mL。结果表明,建立的AIdnb-TRFICA可用于粮食中多种真菌毒素的同步检测,为绿色无毒现场快速、准确定量检测提供了新方法。（3）改良修饰了展青霉素适配体探针,研究建立了基于适配体的苹果汁中展青霉素侧向流层析快速检测方法。以地高辛标记的展青霉素适配体互补链作为捕获探针,生物素标记的适配体作为识别探针,构建了基于“地高辛抗体-捕获探针-识别探针-纳米金信号因子”复合物侧向流层析检测方法,对展青霉素的检测限达2.3 ng/mL,检测范围为2.7～139.8 ng/mL,具有良好的特异性。检测结果与高效液相比对验证表明,该方法可用于苹果汁中展青霉素的快速检测,克服了缺少展青霉素高亲和识别元件导致的现场高灵敏检测技术缺乏的瓶颈难题。（4）系统分析了上述核酸适配体、单克隆抗体、纳米抗体等真菌毒素主要生物识别材料的特性开发与应用前景。研究比较了本文研制的适配体、单克隆抗体与纳米抗体与已报道同类抗体的灵敏度和特异性,结果表明,伏马毒素7A11为迄今报道灵敏度最高,DAS的5E7特异性最好,AFM1抗独特型纳米抗体为首次报道,为快速检测技术提供了高质量核心生物识别材料。通过比较研究各类识别材料发现:适配体的展青霉素分析方法虽然获得了灵敏、准确的定量检测结果,然而适配体与展青霉素的最佳孵育时间长达40 min,为了实现快速检测,该适配体结构仍需进一步优化以缩短反应时间。因此,在缺乏高亲和力抗体时,适配体可作为识别材料的有效选择。本文研制的FB1、DAS、甲萘威、克百威单克隆抗体具有良好的亲和力与特异性,在纳米金、TRFICA及气压传感器检测方法的建立与应用中均实现了灵敏、准确、快速的定量检测。因此,单克隆抗体仍是目前快速检测技术中识别材料的主流选择。纳米抗体是近年来发展起来的新兴识别材料,本文研制的抗独特型纳米抗体对2C9抗体具有特异性识别作用,经纳米抗体修饰后的丝网印刷碳电极具有出色的稳定性。另外,纳米抗体可吸附在硝酸纤维素膜表面,用作无毒替代抗原,在TRFICA方法建立中获得了较高的检测灵敏度,实现了真菌毒素的无毒快速现场检测。因此,纳米抗体在农产品快速检测应用中,既具备单克隆抗体的高亲和性与特异性,又表现出了适配体的稳定与易于修饰的特性。重要的是纳米抗体可作为替代抗原建立无毒快速检测技术,也是其他识别材料无法替代的独有特性。在未来发展方向中,纳米抗体可通过体外亲和力定向改造与结构功能化进一步提高亲和力,拓展新的检测方法与检测模式,在农产品危害物的快速检测领域将具有更为广阔的应用前景。综上所述,研制的系列单克隆抗体、纳米抗体等生物识别材料解决了农产品快速检测中部分真菌毒素高亲和力抗体匮乏难题,并被成功应用于真菌毒素的生物传感检测方法的构建;建立的真菌毒素与农药残留时间分辨荧光同步检测技术解决了多种类风险因子同步检测难的技术瓶颈;而基于纳米抗体无毒抗原生物传感方法的研究解决了农产品快检方法抗干扰性差的难题。因此,本文研制的基于三种识别材料的真菌毒素生物传感方法为目前农产品中面临的挑战提供了解决方案的方法参考。
李园媛[2]（2020）在《水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究》文中研究表明目的:通过水提法制备水蛭提取液,分别采用凝血酶间接检测提取液中水蛭素含量（根据2015版药典）和高分辨液质联用QE技术检测提取液成分,以确定水蛭提取液的主要成分。通过观察水蛭提取液对人视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma RB）WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响,验证水蛭提取液抑制WERI-RB-1细胞生长和侵袭的作用。通过水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor VEGF）、缺氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a HIF-1a）、基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9 MMP-9）的影响及对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶（Phosphatidylinositol 3kinase/Protein Kinae B PI3K/AKT）通路的影响,阐明水蛭提取液抑制WERI-RB-1细胞可能的分子机制。通过观察水蛭提取液对人脐静脉内皮细胞（Human Vascular endothelial cells HUVEC）的活性影响及表达VEGF和血管内皮生长因子受体2（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 VEGFR2）的影响,以此来研究水蛭提取液抑制肿瘤血管生成的潜能。方法:1.水蛭提取液的制备和检测:水提法制备水蛭提取液,并利用凝血酶间接测定水蛭素的含量;高分辨液质联用-QE技术分析水蛭的主要成分。2.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响: 将WERI-RB-1细胞与不同浓度的水蛭提取液（0.02U/ml、0.04U/ml、0.08U/ml、0.16U/ml）共培养0、24、48、72h,经CCK-8筛选最佳药物干预浓度和时间点; 以0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度、48h为药物干预条件,采用流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响; 以2个实验浓度、48h为药物干预条件,采用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡的影响; transwell侵袭实验检测2个实验浓度对WERI-RB-1细胞侵袭作用的影响。对照组细胞仅在培养基中培养,无添加药物。3.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究: 0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,Elisa实验检测水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,RT-PCR检测水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达HIF-1a和MMP-9 m RNA水平的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,Western Blot检测蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达HIF-1a、MMP-9、PI3K、人磷酸化AKT蛋白（Human phosphorylated AKT protein p-AKT）蛋白含量的影响。对照组细胞仅在培养基中培养,无添加药物。4.水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响: 将HUVEC细胞与不同浓度的水蛭提取液（0.02U/ml、0.04U/ml、0.08U/ml、0.16U/ml）共培养0、24、48、72h,经CCK-8筛选最佳药物干预浓度和时间点; 0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度干预HUVEC细胞48h后,RT-PCR检测水蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和VEGFR2 m RNA水平的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预HUVEC细胞48h后,Western Blot检测蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和VEGFR2蛋白含量的影响。结果:1.水蛭提取液的制备和检测:根据2015版《中华药典》中使用凝血酶测定水蛭提取液中水蛭素的浓度,经过多次反复提取及测定,水蛭提取液中水蛭素浓度保持相对稳定。高分辨液质联用分析仪-QE分析结果表明:水蛭提取液中包含有核苷类、氨基酸类、肌苷类、嘌呤类、维生素类等多种成分。2.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响: 0.04U/ml、0.08U/ml的水蛭提取液组在48h对RB细胞的抑制率分别是9.70%、9.92%,与对照组比较,差异具有统计学意义（OD值P<0.05）。 实验组药物浓度干预的RB细胞主要阻滞在G2/M期。对照组、0.04U/ml水蛭提取液组、0.08U/ml水蛭提取液组处于G2/M期的阳性细胞率（%）分别为3.00±2.32、12.59±5.36、14.79±4.12（对照组与水蛭提取液组比较,P<0.01）。 实验组水蛭提取液浓度均可诱导RB细胞凋亡率上调,以上3组细胞凋亡率依次分别为4.64±2.56、37.91±3.44、33.05±2.25（与对照组比较,P<0.01）。 实验组Transwell下室中移行的、每高倍视野细胞数目均较对照组显着减少,3组检测结果（OD值）依次分别为1.21±4.36、0.44±2.08、0.53±3.42（与对照组比较,P<0.01）。3.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究: Elisa实验结果显示:与对照组比较,0.04U/ml和0.08U/ml2个水蛭提取液浓度培养基上清中VEGF的表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。 RT-PCR结果显示:与对照组比较,HIF-1a和MMP-9 m RNA水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）; Western Blot结果显示:与对照组比较,HIF-1a、MMP-9、PI3K、p-AKT的蛋白含量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响: 0.04U/ml和0.08U/ml水蛭提取液干预WERI-RB-1细胞48h后,细胞的抑制率分别为12.96±1.59、14.81±2.17,与对照组比较差异具有统计学意义（OD值P<0.05）。 RT-PCR结果显示:与对照组比较,VEGF、VEGFR2的m RNA水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）; Western Blot结果显示:与对照组比较,VEGF、VEGFR2的蛋白含量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.水提法提取的水蛭提取液中水蛭素含量相对稳定。水蛭提取液中包含有核苷类、氨基酸类、肌苷类、嘌呤类、维生素类等多种成分。2.水蛭提取液通过抑制WERI-RB-1活性、引起周期阻滞、诱导细胞凋亡、抑制细胞侵袭等作用对视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞发挥抑制作用。3.水蛭提取液通过VEGF/PI3K/AKT通路抑制WERI-RB-1细胞,同时抑制WERI-RB-1细胞中HIF-1a、MMP-9活性。4.水蛭提取液可抑制HUVEC细胞活性,抑制HUVEC细胞表达VEGF、VEGFR2蛋白活性。综上所述,在体外实验中,水蛭提取液在一定程度上可能通过VEGF/PI3K/AKT通路和HIF-1a、MMP-9因子影响WERI-RB-1细胞周期分布、凋亡、侵袭作用,从而发挥抑制RB的作用。同时发现水蛭提取液可能通过抑制VEGF、VEGFR2表达抑制脐静脉内皮细胞。我们的研究结果表明:水蛭提取液对RB细胞具有抑制作用,同时可能对RB血管也有抑制作用。从中医理论上进一步验证了其活血化瘀、其破血消瘕的作用。以上研究结果为开发新型抗肿瘤制剂水蛭提供了一定的临床前研究资料。
郭聪颖[3]（2020）在《富硒绿豆发酵液面膜的研发和富硒黑茶的活性初探》文中进行了进一步梳理绿豆是一种富含蛋白质和黄酮的农作物,已被广泛应用于化妆品中;黑茶属于后发酵茶,含有茶多酚和茶色素等物质。本研究以我国着名富硒地区-湖北恩施的富硒绿豆和富硒黑茶为研究对象,探究富硒绿豆发酵液的美白、保湿和抗氧化活性,并且对富硒黑茶的抗氧化和抑菌活性进行了初步探索。主要研究结果如下所示:（1）经微生物发酵的富硒绿豆发酵液,其硒含量为0.003 ppm,总氮含量为18.96 mg/mL,γ-氨基丁酸（γ-GABA）含量为195356.08 nmol/mL。DPPH、ABTS自由基清除实验中,高浓度的富硒绿豆发酵液对DPPH和ABTS自由基的清除率分别为96.87%和99.66%;体外酪氨酸酶抑制实验中,40μL的富硒绿豆发酵液对酪氨酸酶的抑制率就达到了80.72%;进一步测定小鼠黑色素瘤细胞（B16F10）中黑色素的含量,发现8%浓度的富硒绿豆发酵液可以使细胞中的黑色素含量下降至66.79%;成纤维细胞（HFF-1）中水通道蛋白AQP3含量测定实验,结果显示,1.56%,3.13%和6.25%浓度的富硒绿豆发酵液处理细胞后,细胞中AQP3基因的表达量分别为1.86,3.12,4.23,相较于空白组1.02的表达量,AQP3基因的表达量显着增加。证明富硒绿豆发酵液具有明显的体外抗氧化、美白和保湿功效。（2）皮肤刺激性试验结果显示,4只豚鼠皮肤表面正常,未见红斑、焦痂和水肿等不良反应出现;急性眼刺激试验结果显示,3只受试家兔的眼睛,结膜未出现充血、水肿等情况,角膜清晰,虹膜正常,也没有出现水肿至眼睑近半闭合或者大半闭合等眼损害问题;皮肤变态反应试验结果显示,20只受试豚鼠在经历了诱导接触和激发接触之后,其皮肤没有出现红斑、焦痂和水肿。富硒绿豆发酵液中汞（Hg）、铅（Pb）、镉（Cd）均未检出,砷（As）也仅为0.115 ppm,远远小于《化妆品卫生规范2015版》相关规定限量2 ppm。以上实验结果表明富硒绿豆发酵液对皮肤、眼睛为零刺激性,不存在安全性问题,可以很好的应用到护肤品中。（3）以富硒绿豆发酵液为主要功效性物质的面贴膜,提供给31名18-60周岁的女性使用4周,在0周,2周和4周的时候对受试者皮肤进行测定,以受试者面部皱纹数量、皱纹体积、皱纹面积和皱纹长度为抗衰指标,受试者面部L*、b*、ITA°和黑色素含量的变化是皮肤的美白指标,皮肤角质层含水量（CORNE）和经皮水分流失率（TEWL）为保湿指标。结果表明,皱纹的数量、面积和长度都有显着性降低;而皱纹体积在使用2周时是没有明显变化的,使用4周后明显降低。代表皮肤黑白度的L*值、ITA°值显着变大,黑色素含量显着降低,而表示皮肤黄度的b*值没有明显差别。长效保湿结果表明受试者皮肤角质层含水量（CORNE）显着增加,经皮水分流失率（TEWL）的明显下降;短效保湿测试显示皮肤CORNE值增加。以上结果证明了富硒绿豆发酵液在人体上具有优异的抗衰、美白和保湿的效果。（4）富硒黑茶提取物的成分分析结果表明,硒、茶多糖、茶多酚和黄酮类等物质含量较高,含量分别为0.18 ppm,24.88%,25.42%和21.1%,茶色素含量较低。0.32 mg/mL的富硒黑茶提取物,对DPPH、ABTS自由基的清除率分别为92.73%和98.43%。0.08 mg/mL的富硒黑茶提取物可以将被2μM H2O2刺激的成纤维细胞（HFF-1）的存活率从63.32%提升至79.83%;H2O2处理过的细胞中ROS、SOD、MDA的含量分别为38.67%,1.08 U/102Cell和13.75 nmol/102Cell,经一系列浓度的富硒黑茶提取物处理细胞后,ROS和MDA显着减少,SOD显着增加,至0.08 mg/mL时,ROS、SOD、MDA的含量分别为24.10%,2.01 U/102Cell和9.35 nmol/102Cell。三者的测定结果表明,富硒黑茶提取物可以通过抑制细胞中自由基的生成,促进自由基的清除代谢等途径达到抗氧化效果。抑菌实验结果表明,富硒黑茶提取物在0.4 g/mL的时候,对黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有抑制作用,而对大肠杆菌和白色念珠菌则无抑制作用,表明富硒黑茶提取物对有害菌的抑制作用并不明显。汞、砷、铅和镉的含量分别为0.004 ppm,0.058 ppm,0.82ppm和0.104 ppm,均小于规定范围。皮肤刺激性试验,眼刺激性试验以及皮肤过敏性试验证明了2%的富硒黑茶提取物的安全性。
史澍睿[4]（2020）在《基于光学疗法的多功能纳米载药体系靶向口腔鳞状细胞癌的协同作用研究》文中指出研究背景和目的:口腔鳞状细胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC）是一种常见的口腔颌面部恶性肿瘤,传统的OSCC治疗方法以手术配合放化疗为主。然而,口腔颌面部是既关系到美观,同时还承担着咀嚼、发音、吞咽和腺体分泌等重要功能的特殊部位,手术切除往往会从生理和心理上给患者带来不可逆的损伤;放疗、化疗以及其他针对肿瘤的辅助治疗手段不仅具有一定毒副作用,也通常难以实现对OSCC的彻底治愈。因此,诸如光学疗法、基因疗法、免疫疗法和分子靶向药物等新兴的抗肿瘤方式得到了越来越多的关注。光学疗法包括光热疗法（Photothermal therapy,PTT）和光动力疗法（Photodynamic therapy,PDT）,原理为利用光热转换剂或光敏剂在相应波长激发光照射下触发升温效应和活性氧自由基（Reactive oxygen species,ROS）的大量产生,进而发挥直接杀伤肿瘤细胞、关闭肿瘤新生血管和激活机体的抗肿瘤免疫等治疗作用。PTT和PDT相比于传统OSCC疗法具有无创或微创、可控且不易产生耐药等优势。利用纳米载药体系将光敏剂与光热转换剂进行负载,同时共载化疗药物、基因等治疗因子,并对纳米粒子进行进一步的靶向性修饰,不仅可以克服游离药物毒副作用较大、稳定性和肿瘤选择性较差等缺陷,提升药物对肿瘤的精准递送效率,还可实现不同疗法之间的协同联合抗肿瘤作用,在OSCC治疗方面具有广阔的应用前景。本研究为实现光学疗法与其它治疗方法（化疗与基因治疗）联合对抗OSCC,设计了两种结构简单且功能多样的纳米载药体系:1.以具备OSCC靶向性的多肽（cycle RGD,c RGD）为靶向性配基,以具有ROS响应性断键能力的酮缩硫醇（Thioketals,TL）为连接桥,构建基于氨基化聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）的共载光敏剂血卟啉（Hematoporphyrin,HP）和化疗药物阿霉素（Doxorubicin,DOX）且兼具OSCC靶向性与ROS响应释药性能的多功能纳米载药体系（c RGD-PEG-TL-DOX/HP,RPTD/HP纳米粒）,以实现对两种治疗剂的精准递送和控制释放,并联合PDT与化疗高效抑制OSCC的体内外生长。2.以聚氨基酯（Poly（β-aminoester）s,PBAE）和聚乳酸-羟基乙酸共聚物（Poly（lactic-co-glycolic acid）,PLGA）为载体材料,以同源肿瘤细胞膜（Cancer cell membrane,CCM）为靶向修饰材料,构建共载兼具光敏与光热性能的近红外荧光染料吲哚菁绿（Indocyanine green,ICG）和抗氧化应激转录因子——核因子E2相关因子2（NF-E2-related factor,Nrf2）的干扰RNA（Nrf2-si RNA）的多功能仿生纳米载药体系（CCM@PBAE/PLGA/ICG-Nrf2-si RNA,M@PPI-si RNA纳米粒）,通过同源肿瘤靶向递送治疗剂和调控OSCC细胞内氧化抵抗机制来放大PDT效应,实现PTT/PDT与基因疗法的协同抗肿瘤作用。本论文将主要从多功能纳米体系的制备和表征,及其在细胞和动物水平对OSCC的抑制作用评估与作用机制探究几个方面进行系统研究。实验方法:第一部分具有OSCC靶向性与ROS响应性的多功能纳米载药体系的研究1.制备及其体外表征:将DOX与PEG通过ROS响应性化学键TL偶联合成PTD,而后c RGD分子中的巯基与PTD分子末端的马来酰亚胺发生加成反应,合成抗肿瘤靶向性前药RPTD;运用核磁共振波谱法（Nuclearmagnetic resonance spectroscopy,1H NMR）和红外光谱分析法（Infrared spectroscopy,IR）考察PTD与RPTD的化学结构;在H2O2溶液中考察PTD分子中TL的ROS响应性断键性能;以RPTD为载体材料,采用纳米沉淀法制备携载光敏剂HP的多功能纳米体系RPTD/HP纳米粒;利用透射电镜观察纳米粒的形貌,采用动态激光散射法检测纳米粒的粒经及其分布;通过荧光光谱法验证RPTD和HP分子间的π-π共轭作用,采用SOSG荧光探针法考察RPTD/HP纳米粒在激光照射下触发ROS生成的能力,并利用体外动态透析法考察RPTD/HP纳米粒的ROS响应性释药能力。2.RPTD/HP纳米粒的体外抗肿瘤作用评价:采用激光共聚焦显微镜和流式细胞术考察OSCC细胞系CAL-27及人口腔上皮细胞系HOEC对PTD/HP和RPTD/HP纳米粒的摄取情况及其激光照射下DOX的亚细胞分布,体外考察RPTD/HP纳米粒的OSCC靶向性;运用ROS荧光探针DCFH-DA检测RPTD/HP纳米粒在CAL-27细胞中触发ROS产生的情况,体外评价其PDT效应;采用荧光探针法考察CAL-27细胞中线粒体的损伤水平,采用免疫荧光技术考察细胞色素c（Cytochrome c,Cyt c）的亚细胞分布,初步探讨PDT诱导细胞凋亡的作用机制;考察RPTD/HP联合激光照射对CAL-27细胞体外生长的抑制、细胞凋亡的诱导以及细胞周期的阻滞作用,评价纳米粒联合PDT与化疗的协同抗肿瘤疗效。3.RPTD/HP纳米粒的体内抗肿瘤作用评价:通过在Balb/c裸鼠皮下注射CAL-27细胞构建OSCC小鼠模型;采用近红外荧光染料Cy5.5标记PTD/HP和RPTD/HP纳米粒,尾静脉注射给药后于小动物活体成像系统下观察PTD/HP/Cy5.5与RPTD/HP/Cy5.5纳米粒在小鼠体内的组织分布及其在肿瘤部位的滞留能力,体内评价RPTD/HP纳米粒的OSCC靶向性;对荷瘤小鼠采用尾静脉注射给药和肿瘤局部激光照射的治疗方式,每5 d治疗1次,持续治疗4次;治疗期间监测荷瘤小鼠的体重和肿瘤的体积;治疗结束后取主要器官和肿瘤进行组织病理学分析,包括苏木精/伊红染色（H&E）和CD31免疫组化染色,综合评价RPTD/HP纳米粒联合PDT与化疗对CAL-27荷瘤小鼠体内肿瘤生长的抑制作用。第二部分同源OSCC细胞膜修饰的多功能纳米载药体系的研究1.制备与体外表征:以PBAE与PLGA为载体材料,采用复乳法制备携载光敏剂ICG的PPI纳米粒;利用PPI纳米粒与Nrf2-si RNA之间的正负电荷吸附作用制备PPI-si RNA复合纳米粒;提取OSCC细胞系SCC-25的CCM,并采用挤压法实现CCM在PPI-si RNA纳米粒表面的包覆,制备M@PPI-si RNA纳米粒。通过透射电镜观察纳米粒的形貌;采用动态激光散射法检测纳米粒的粒径及其分布,检测其Zeta电位;利用琼脂糖凝胶电泳实验探索PPI纳米粒与Nrf2-si RNA复合的最佳比例;采用SDS-PAGE凝胶电泳实验考察M@PPI-si RNA纳米粒对CCM相关蛋白的保留情况;采用紫外分光光度法检测纳米粒的载药情况;利用红外热成像仪和活性氧探针ABDA考察激光照射下M@PPI-si RNA的升温效应和促ROS生成能力,评价其体外PTT与PDT效应。2.M@PPI-si RNA纳米粒的体外抗肿瘤作用评价:采用激光共聚焦显微镜和流式细胞术定量检测PPI-si RNA和M@PPI-si RNA纳米粒在小鼠黑色素瘤细胞系B16、人口腔上皮细胞系HOEC和OSCC细胞系SCC-25中的摄取及其亚细胞分布情况,评价M@PPI-si RNA纳米粒的OSCC体外靶向性及其逃逸内涵体/溶酶体胞内递送Nrf2-si RNA的性能;采用免疫荧光技术考察SCC-25细胞内热休克蛋白60（Heat shock protein 60,HSP60）的表达情况,考察M@PPI-si RNA纳米粒的PTT效应;采用ROS荧光探针DCFH-DA检测SCC-25细胞中ROS的生成情况,同时采用免疫荧光染色对细胞内Cyt c与线粒体进行共定位分析,评价M@PPI-si RNA纳米粒的PDT效应,并探讨其机制;采用Western Blotting技术检测SCC-25细胞中Nrf2及其下游调控的转录基因谷氨酸-半胱氨酸连接酶（GCLC）和谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基（GCLM）的表达水平,探讨Nrf2-si RNA对PDT效应的助力机制;运用MTT实验、活死细胞染色及凋亡试剂盒考察激光照射下M@PPI-si RNA纳米粒对SCC-25细胞体外生长的抑制作用。3.M@PPI-si RNA纳米粒的体内抗肿瘤作用评价:通过皮下注射SCC-25细胞构建OSCC荷瘤小鼠模型;尾静脉注射M@PPI-si RNA纳米粒,随后通过活体成像系统考察其组织分布与肿瘤滞留性能,评价其OSCC体内靶向性;尾静脉注射给药后,对小鼠肿瘤进行局部激光照射,期间采用红外热成像仪考察肿瘤部位的升温效应;治疗后采用SOSG荧光探针检测肿瘤组织中ROS的生成水平;采用免疫组化法检测肿瘤组织中HSP60和Nrf2的蛋白表达水平;尾静脉注射给药结合激光照射治疗后,持续监测SCC-25荷瘤小鼠肿瘤的生长与体重变化情况,治疗结束后对小鼠主要器官与肿瘤进行病理学分析（包括H&E染色和CD31免疫组化染色）,考察M@PPI-si RNA纳米粒联合PTT/PDT和Nrf2-si RNA对OSCC的协同治疗疗效。研究结果:第一部分具有OSCC靶向性与ROS响应性的多功能纳米载药体系的研究1.成功合成RPTD,并通过IR和1H NMR对其化学结构进行了确证;RPTD具有两亲性,能够与疏水性光敏剂HP在水性介质中通过π-π共轭与疏水相互作用组装形成RPTD/HP纳米粒,进而实现对HP和DOX的有效共载;RPTD/HP纳米粒呈球状形貌,粒径和分散系数（Polydispersity index,PDI）分别为186.2 nm和0.156,在体外具有良好的分散性和稳定性,激光照射能够诱导纳米粒生成大量ROS,表现出显着的PDT效应。RPTD分子中的TL连接键在H2O2溶液中能够高效断键,激光照射可以促发RPTD/HP纳米粒中DOX的快速释放,证实该纳米体系具有ROS响应性释药性能。2.在CAL-27细胞中,RPTD/HP纳米粒的摄取水平明显高于PTD/HP纳米粒,而HOEC细胞对两种纳米粒的摄取无显着差异,证明是c RGD的表面修饰介导了RPTD/HP纳米粒对OSCC细胞的靶向性。激光照射下,RPTD/HP纳米粒触发了CAL-27细胞中ROS大量生成,进而表现出线粒体膜的损伤和Cyt c从线粒体向细胞质中的释放。产生的ROS可以促使DOX从解体的纳米粒中释放和入核,进而在细胞杀伤、细胞凋亡及细胞周期阻滞等方面表现出显着的PDT与化疗的协同效应。3.经尾静脉注射给药后,RPTD/HP/Cy5.5纳米粒在CAL-27荷瘤小鼠体内表现出明显优于PTD/HP/Cy5.5纳米粒的肿瘤靶向与滞留能力;8 h后在肿瘤中蓄积,24 h后主要滞留于肿瘤病灶,进一步说明c RGD的表面修饰赋予了RPTD/HP纳米粒对OSCC的主动靶向性。荷瘤小鼠体内治疗实验结果显示,RPTD/HP纳米粒结合激光照射能够在最大程度上抑制小鼠体内肿瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡或坏死,抑制肿瘤血管的新生,说明RPTD/HP纳米粒的OSCC靶向性能和ROS响应性释药性能有利于其发挥PDT与化疗的协同抗肿瘤效应。治疗过程中小鼠体重无显着变化,治疗结束后主要器官无病理学损伤,说明基于RPTD/HP纳米粒的协同治疗策略具有良好的体内安全性。第二部分同源OSCC细胞膜修饰的多功能纳米载药体系的研究1.制备的PPI和PPI-si RNA纳米粒具有球状形貌与致密的内部结构,平均粒径分别为159.4 nm和168.3nm,Zeta电位为+43.6和+26 m V;ICG在PPI纳米粒中的负载量和包封率分别为1.9%和91.8%;从SCC-25细胞中提取CCM,并采用挤压法成功包覆于PPI-si RNA纳米粒表面,制备获得M@PPI-si RNA纳米粒,粒经为190.5 nm,Zeta电位为?38 m V;PPI纳米粒对Nrf2-si RNA具有高效吸附能力,而M@PPI-si RNA则成功保留了CCM表面的蛋白特征;激光照射下,M@PPI-si RNA纳米粒表现出显着的升温效应和ROS促生成作用,说明其具有良好的体外PTT和PDT性能。2.B16和HOEC细胞对PPI-si RNA和M@PPI-si RNA纳米粒的摄取无显着差异,但SCC-25细胞对M@PPI-si RNA纳米粒的摄取能力明显高于PPI-si RNA纳米粒,说明同源CCM的修饰促进了OSCC细胞对纳米粒的内化。通过M@PPI-si RNA纳米粒的递送,Nrf2-si RNA能够逃逸内涵体/溶酶体进入细胞质发挥RNA干扰效应。在SCC-25细胞中,M@PPI-si RNA纳米粒结合激光照射显着上调了HSP60的蛋白表达,并且触发了胞内ROS的大量生成,证实其具有良好的PTT/PDT效应。结合激光照射,PPI-si RNA和M@PPI-si RNA纳米粒相较于PPI纳米粒显着下调了Nrf2、GCLM与GCLC的蛋白表达,从而表现出更为显着的细胞杀伤和细胞凋亡诱导效应,促使了更多的Cyt c从线粒体向细胞质的释放,说明同源CCM的靶向作用和Nrf2-si RNA的抗氧化抑制作用放大了ICG的PTT/PDT效应。3.经尾静脉注射给药后,M@PPI-si RNA纳米粒在SCC-25荷瘤小鼠体内表现出明显优于PPI-si RNA纳米粒的肿瘤靶向与滞留能力,进一步说明同源CCM的表面修饰赋予了M@PPI-si RNA纳米粒对OSCC的主动靶向性。结合激光照射后,M@PPI-si RNA纳米粒诱导了体内肿瘤局部的温度升高并显着上调了其HSP60的表达水平,证实其良好的体内PTT效应;同时还触发了肿瘤组织中ROS的大量生成并下调了Nrf2的表达水平,证实其显着的体内PDT效应。荷瘤小鼠体内治疗实验结果显示,M@PPI-si RNA纳米粒结合激光照射能够显着抑制小鼠体内肿瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡或坏死,抑制肿瘤血管的新生,并且表现出强于PPI与PPI-si RNA纳米粒结合激光照射治疗的体内肿瘤抑制作用,说明同源CCM介导的OSCC靶向递送与Nrf2-si RNA的抗氧化抑制效应可以发挥助力PTT/PDT的协同抗肿瘤作用。结论:本研究设计并构建了两种结构简单的多功能纳米载药体系,实现了对光敏剂和其它抗肿瘤治疗剂的高效共载、靶向递送、可控释放及其联合光学疗法（PTT和PDT）与其它治疗方法（化疗和基因疗法）对OSCC的协同抑制作用。第一种多功能纳米载药体系是以c RGD为靶向性配基,以具有ROS响应性断键能力的TL为连接桥,构建的共载光敏剂HP和化疗药物DOX,且兼具OSCC靶向性与ROS响应释药性能的RPTD/HP纳米粒,获得了联合PDT与化疗的OSCC协同抑制效应。第二种多功能纳米载药体系是同源肿瘤细胞膜表面修饰的共载ICG和Nrf2-si RNA的M@PPI-si RNA纳米粒,通过同源肿瘤靶向递送及调控抗氧化抵抗机制来放大ICG的PTT/PDT效应,获得对OSCC的协同抑制效应。综上所述,本研究为OSCC的精准治疗以及联合光学疗法和其它治疗方法提供了纳米载体平台和策略参考。
陈露露[5]（2019）在《乌骨鸡黑色素含量测定及黑色素细胞裂解液活性研究》文中进行了进一步梳理乌骨鸡（Black-bone silky fowl,BSF）又称乌鸡、泰和鸡等,是江西特有的药食两用资源。它集药、补、食三大功能于一体,对人体具有特殊的滋补功能,能够调节身体机能,提高人体免疫力。乌骨鸡黑色素是乌骨鸡最重要的功能成分之一,但由于溶解性差（不溶于水和有机溶剂）,化学结构还不清楚,导致目前乌骨鸡黑色素的测定还未有便捷、可靠的方法,因此寻找一种较简单、快速、准确且无需将黑色素完全溶解的新方法显得至关重要。本文成功地建立了一种测定乌骨鸡黑色素含量的H2O2氧化-荧光分析法方法,可用于快速、准确地分析乌骨鸡肉以及乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的含量;乌骨鸡及其黑色素均具有良好的抗炎以及抗氧化效果,并且乌骨鸡黑色素是由黑色素细胞生成,乌骨鸡黑色素细胞在乌骨鸡体内广泛分布,本文通过低温超声裂解法获得乌骨鸡黑色素细胞裂解液（BMCL）,探究BMCL对LPS诱导的RAW264.7细胞的炎症反应的抗炎作用,BMCL对H2O2诱导的HUVEC细胞的氧化损伤的保护作用。本研究为进一步阐明乌骨鸡滋补药用、营养作用以及促进乌骨鸡活性成分的开发和利用提供了实验科学依据。主要研究结论归纳如下:1.建立一种测定乌骨鸡肉中黑色素含量的H2O2氧化-荧光分析方法。结果表明:乌骨鸡黑色素标准品（600μg/mL）的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm,乌骨鸡黑色素在浓度范围50-600μg/mL内的回归方程为y=0.0094X+0.6926,r=0.9986,荧光分析法的方法检出限为0.30μg/mL,紫外分光光度法的方法检出限为3.68μg/mL。荧光分析方法测定的黑色素最低浓度为0.5μg/mL,而紫外分光光度法测定的最低浓度为5μg/mL。样品前处理的最佳条件为:NaOH浓度最佳范围为0.1-0.2 M,超声时间为40 min,超声温度为70℃。乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为55℃、氧化时间为2 h,过氧化氢浓度为20%-25%。稳定实验RSD为1.49%、仪器精密度实验RSD值为2.03%。加标回收实验中平均回收率为102.865%,RSD为4.505%,取0.2 g鲜重采用该方法测得腿部肌肉,胸肌和鸡皮肤中的黑色素含量分别为0.879±0.023 mg,0.681±0.012 mg和2.162±0.075 mg,分别占鲜重的0.439%,0.340%,1.081%。以上结果表明该方法准确性较高,且无需从样品中提取黑色素,大大缩短了反应时间,有效地简化了分析操作。2.建立一种测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量的H2O2氧化-荧光分析方法。结果表明:乌骨鸡黑色素标准品（100μg/mL）的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm。乌骨鸡黑色素在浓度范围10-100μg/mL内的回归方程为y=0.0147X+0.3138,r=0.9974,乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为55℃、氧化时间为2h,过氧化氢浓度为24%-26%。这与上述确认的乌骨鸡黑色素最佳氧化反应条件基本一致,重复性实验RSD值为4.59%,精密度实验RSD值为1.87%。在A375细胞中添加不同浓度的黑色素标准品（25μg/mL、40μg/mL、80μg/mL）,测定值与理论值的相对误差分别为2.78%、3.53%、0.25%,在乌骨鸡黑色素细胞样品中添加不同浓度的乌骨鸡黑色素标准品,所得的平均加标回收率为95.57%,RSD值为4.00%,结果表明H2O2氧化-荧光分析方法测定准确可靠,并且不受胞内杂蛋白和脂质的影响。3.当IBMX浓度在200-500μM之间时,各浓度能显着抑制黑色素细胞的生长（P<0.01）,并且乌骨鸡黑色素细胞存活率随着IBMX的浓度的增加而降低,细胞存活率在40.64%-80.98%之间。浓度为100μM的IBMX对乌骨鸡黑色素细胞的活性并无显着的影响。浓度为100μM和300μM的IBMX相对于空白组能够显着地促进乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的合成量（P<0.01）。当IBMX浓度达到400μM时也能显着提高乌骨鸡黑色素细胞中的黑色素含量（P<0.05）。200μM以及500μM的IBMX对黑色素细胞合成黑色素并无显着的促进作用。综上所述,在所试浓度范围内,IBMX能够显着促进乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的合成。4.观察RAW264.7细胞的形态,用MTT法测定细胞活力以及测定RAW264.7细胞的NO生成量,探究促进RAW264.7细胞产生炎症的最佳LPS浓度,结果发现LPS为1μg/mL时对细胞毒性最小、NO生成量最大。因此建立了LPS诱导RAW264.7细胞的炎症模型,在此基础上进一步研究了不同浓（0.2-125μg/mL,以乌骨鸡黑色素细胞胞内蛋白的浓度计为细胞的裂解液浓度）乌骨鸡黑色素细胞裂解液对RAW264.7细胞的生长的影响,以及在不同作用时间和不同作用模式下,乌骨鸡黑色素细胞的裂解液在对RAW264.7的NO生成量的影响。结果表明:乌骨鸡黑色素细胞的裂解液浓度在0.2-25μg/mL内对RAW264.7细胞的生长无显着影响,当BMCL浓度上升至25和125μg/mL时,细胞的存活率分别为115.66%和157.50%,和空白组相比有显着的差异（P<0.01）,能够促进RAW264.7细胞的增殖。因此选择1、5、25μg/mL分别作为乌骨鸡黑色素细胞裂解液的低、中和高浓度进行后续实验。在预防模式、共同作用模式以及治疗模式下,浓度为1、5、25μg/mL乌骨鸡细胞的裂解液的对细胞NO生成量有不同程度的影响,相比之下,预防模式下乌骨鸡细胞的裂解液对细胞NO生成的抑制率最大,抗炎效果最明显。当作用不同时间时,高、中和低浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液均能显着降低细胞NO生成量（P<0.01）。5.钙、铁元素作用后的高（25μg/mL）、中（5μg/mL）和低浓度（1μg/mL）的乌骨鸡黑色素细胞裂解液相对模型组（1μg/mL）均能显着降低RAW264.7细胞的NO的生成量（P<0.01）,这表明钙、铁元素能增强乌骨鸡黑色素细胞裂解液抗炎作用,且氯化钙相对于天门冬氨酸螯合钙更能促进乌骨鸡黑色素细胞裂解液抗炎效果的增强,Fe2+的促进作用强于Fe3+。6.建立H2O2诱导HUVEC细胞损伤的模型,观察细胞形态,运用MTT法测定细胞活力,测定不同浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液作用后的细胞培养液中LDH活性、SOD酶活性以及MDA含量。结果表明H2O2致HUVEC细胞达半数死亡的浓度为1 mM,且该浓度下细胞培养液中的LDH活性值最高,以此浓度建立HUVEC细胞损伤的模型。在此基础上的研究结果表明,浓度为0.2-25μg/mL的乌骨鸡黑色素细胞裂解液对HUVEC细胞活性无显着影响,当浓度达到25μg/mL以上时,对HUVEC细胞生长的促进作用较显着（P<0.01）。本文选择1、5、25μg/mL作为乌骨鸡黑色素细胞裂解液的低、中和高浓度进行后续实验。1和5μg/mL的VC对HUVEC细胞活性无显着影响,选用5μg/mL的VC作为对照组,比较乌骨鸡黑色素细胞裂解液和VC对氧化损伤保护作用的强弱。进一步研究结果表明,相对于模型组（1mM H2O2）,高、中浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液能够显着增加HUVEC细胞的存活率（P<0.01）,同浓度的中浓度的VC并未显增加HUVEC细胞的存活率。高、中和低浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液能够显着降低细胞培养液中LDH酶活,增加SOD酶活性（P<0.01）。相对于模型组（1 mM H2O2）,中浓度的VC对细胞培养液中的LDH酶活和SOD酶活都无显着影响。高、低浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液能够降低细胞中MDA的含量,相比之下,中浓度的VC也能显着降低MDA含量。综上所述,乌骨鸡黑色素细胞裂解液的对氧化损伤的HUVEC细胞的保护作用强于VC。
鞠晓畅[6]（2019）在《胡桃楸茎枝水提物的体外吸收与代谢研究》文中进行了进一步梳理目的:胡桃楸（Juglans mandshurica Maxim.）又名山核桃、核桃楸,为胡桃科胡桃属植物。在《辽宁省中药标准》中,记载了胡桃楸的根皮、树皮和果皮具有抗肿瘤作用,同时民间也记载口服胡桃楸水煎液治疗恶性肿瘤。已有文献研究报道了胡桃楸不同部位有机溶剂提取物在体内外的抗肿瘤作用,但对胡桃楸水提物的研究较少。本课题组已经从胡桃楸茎枝、果、叶和根中分析鉴定了100余种化合物。为了进一步明确胡桃楸水煎液口服后能够吸收入体内的成分,本论文在课题组前期研究结果的基础上,对胡桃楸茎枝水提物的体外抗肿瘤作用,及其体外吸收、代谢的成分进行了研究。为胡桃楸的药效物质基础研究奠定了基础。材料与方法:1.材料1.1本论文所研究的药材样品胡桃楸茎枝,采摘于辽宁省大连市普兰店莲山镇,趁鲜切片、冷冻干燥。1.2实验动物SD大鼠,雄性,购于辽宁长生生物技术有限公司。大鼠饲养于辽宁中医药大学动物实验中心空气层流架SPF级环境中。1.3 Caco-2细胞购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司,来自于人源结肠癌组织。人胃癌细胞（HGC-27）购自上海博古生物科技有限公司,来自于人源未分化胃癌;高分化人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）购自上海细胞库。2.方法2.1胡桃楸茎枝水提物的制备及化学成分研究:采用热回流和真空冷冻干燥的方法制备胡桃楸茎枝水提物冻干粉。以UHPLC-MS/MS分析和鉴定胡桃楸茎枝水提物中的化学成分。2.2体外抗肿瘤作用和毒性研究:分别以胡桃楸茎枝水提物对人胃癌细胞（HGC-27）和高分化的人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的增殖抑制作用作为评价指标,采用MTT比色法评价胡桃楸水提物对HGC-27和SH-SY5Y细胞形态和相对增殖率（RGR）的影响,进而评价胡桃楸茎枝水提物对肿瘤细胞的选择性抑制作用。2.3 Caco-2细胞模型中吸收和代谢研究:采用MTT比色法评价胡桃楸茎枝水提物对Caco-2细胞的相对增殖抑制率,判断细胞毒性,确定给药浓度;采用胡桃楸茎枝水提物与Caco-2细胞共培养,将一定浓度的胡桃楸茎枝水提物作用于Caco-2单层细胞,收集细胞破碎液,通过UHPLC-MS/MS联用技术分析和鉴定Caco-2细胞中吸收和代谢的成分。2.4大鼠离体外翻肠囊模型中吸收和代谢研究:以乳酸脱氢酶（LDH）评价大鼠离体外翻肠段的活性,以确定大鼠离体外翻肠囊模型的取样时间和给药浓度;应用UHPLC-MS/MS分析和鉴定胡桃楸茎枝水提物在十二指肠、空肠和回肠中吸收和代谢的成分。2.5没食子酸和逆没食子酸的体外人肝微粒体代谢研究:选用人源肝微粒体,模拟人体内环境,以对照药物非那西丁的代谢确定肝微粒体活性、优化孵育条件;通过UHPLC-MS/MS分析鉴定胡桃楸水提物中主要成分没食子酸和逆没食子酸在人肝微粒体孵育体系中的代谢产物。结果:1.胡桃楸茎枝水提物的制备及化学成分研究:胡桃楸茎枝水提物冻干粉的得率为12.5%,计算生药量为8 g·g-1。共鉴定了胡桃楸茎枝水提物中99个成分,包括53个鞣质、33个有机酸、10个萘烷衍生物、2个氨基酸和1个黄酮。2.体外抗肿瘤作用和毒性研究:在体外抗肿瘤作用与毒性研究中,加入不同浓度胡桃楸茎枝水提物后,当浓度≤0.1 mg·mL-1时,对HGC-27和SH-SY5Y细胞未显示细胞毒性;当浓度达0.5 mg·mL-1时,胡桃楸茎枝水提物对HGC-27细胞的RGR为51.48%,有明显的细胞毒性;此时对SH-SY5Y细胞无细胞毒性。当浓度达1.0mg·mL-1时,胡桃楸茎枝水提物对HGC-27细胞的RGR为45.45%,有明显的细胞毒性;SH-SY5Y细胞的RGR为88.16%,仍无细胞毒性。3.Caco-2细胞模型中吸收和代谢研究:在胡桃楸茎枝水提物对Caco-2细胞毒性研究中,浓度在0.22.0 mg·mL-1范围内,Caco-2细胞的相对增殖抑制率均>75%,细胞毒性均≤1,说明在该浓度范围内,胡桃楸茎枝水提物对Caco-2细胞无毒性作用,故选定在Caco-2细胞吸收模型中胡桃楸茎枝水提物浓度为0.8 mg·mL-1。最终分析鉴定了胡桃楸茎枝水提物在Caco-2细胞模型中吸收的成分2个,分别为柠檬酸和没食子酸,代谢的成分1个,推测为二甲氧基苯甲酸,代谢途径为去羟基及甲基化。4.大鼠离体外翻肠囊模型中吸收和代谢研究:以LDH释放量为指标,确定大鼠离体外翻肠囊模型的取样时间为150 min,胡桃楸茎枝水提物的给药浓度为0.005 g·mL-1（以生药计）。分析鉴定了胡桃楸茎枝水提物在十二指肠、空肠和回肠中吸收成分共41个,包括鞣质（13个）、有机酸（16个）、萘烷（9个）、二芳基庚烷（2个）和木脂素（1个）五类化合物。鉴定了十二指肠、空肠和回肠中代谢的成分共11个,其中10个为与葡萄糖醛酸结合的产物、1个为硫酸酯化产物。其原形成分包含了胡桃楸茎枝水提物中的鞣质类成分3个,有机酸类成分2个,萘烷类成分6个。5.没食子酸和逆没食子酸的体外人肝微粒体代谢研究:建立的肝微粒体孵育体系能够将非那西丁代谢为对乙酰氨基酚,代谢率约为74.89%,说明在试验条件下,人源肝微粒体有生物活性。继而研究了没食子酸和逆没食子酸在该孵育体系中的代谢,结果未发现两者的代谢产物,但发现加入没食子酸和逆没食子酸后能够使孵育体系中的成分发生变化。结论:1.胡桃楸茎枝水提物中成分主要为鞣质、有机酸、萘烷衍生物等。2.胡桃楸茎枝水提物在体外对肿瘤细胞的增殖具有选择性抑制作用。3.胡桃楸茎枝水提物中主要成分:鞣质、有机酸和萘烷衍生物能够通过小肠壁或Caco-2细胞壁而被吸收。小肠壁代谢酶主要使吸收成分发生葡萄糖醛酸化代谢反应。4.初步推测没食子酸和逆没食子酸在体外代谢模型中不发生代谢反应。
李然[7]（2018）在《兽药氟苯尼考及其代谢物与甲砜霉素残留免疫分析方法的研究》文中指出氟苯尼考（Florfenicol,FF）和甲砜霉素（Thiamphenicol,TAP）作为新型氯霉素类广谱抗生素,被广泛用于兽医临床上细菌感染性疾病的预防和治疗,也经常被滥用及非法添加到动物饲料、注射药剂及内服药剂中。但由于氟苯尼考及甲砜霉素在动物源性食品及环境中的残留易导致致病菌株产生耐药性,且二者对于人体及动物均具有血液毒性、免疫毒性和胚胎毒性等毒性,威胁消费者健康。因此,加强对此类药物的监控、控制二者在动物性食品中的残留很有必要。目前对氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺（Florfenicolamine,FFA）、甲砜霉素的分析手段主要有液相色谱、液相色谱-串联质谱法等仪器法,仪器法准确可靠,但存在成本高、操作复杂耗时、通量低、不易普及等不足。免疫分析法具有快速、灵敏、低成本、易于现场操作等特点,作为初筛方法,可与仪器法搭配使用,满足大批量样品的快速筛查需求。本文以氟苯尼考、氟苯尼考胺及甲砜霉素为研究对象,设计合成系列半抗原并制备了有效单克隆抗体及多克隆抗体,通过对抗体-包被原的组合筛选,建立了三种不同检测性能的间接竞争酶联免疫分析法。主要研究内容和结果如下:（1）以氟苯尼考及甲砜霉素结构为基础制备了6种相关半抗原（FF、FFA、FFD、FFM、FFAC、TAPN）,偶联载体蛋白后通过动物免疫获得抗血清。经鉴定,鼠抗血清FFD-BSA和FFD-KLH能够特异性识别检测对象,同源包被条件下效价均为1:128000,对1μg/mL的氟苯尼考抑制率分别为80%和74%。进一步用以上两种免疫抗原制备兔抗血清及鼠源单克隆抗体,经过抗体-包被原筛选,得到不同检测效果的抗体-包被原组合。（2）基于兔多抗pAb-FFD-KLH1与包被原FFM-OVA,建立了同时检测氟苯尼考和甲砜霉素残留的间接竞争酶联免疫分析方法（ciELISA）。该方法对于氟苯尼考的IC50为1.32 ng/mL,线性检测范围为0.31-5.61 ng/mL,检出限为0.12 ng/mL;对于甲砜霉素的IC50为3.21 ng/mL,线性检测范围为0.6-17.01 ng/mL,检出限为0.24 ng/mL;与氯霉素等多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉、猪饲料、鸡饲料中氟苯尼考和甲砜霉素的添加回收率均在77%-116%之间,变异系数<16%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。（3）基于兔多抗pAb-FFD-KLH2与包被原FF-OVA,建立了同时检测氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法对于氟苯尼考的IC50为8.94ng/mL,线性检测范围为2.32-34.46 ng/mL,检出限为1.06 ng/mL;对于氟苯尼考胺的IC50为10.96 ng/mL,线性检测范围为3.05-39.45 ng/mL,检出限为1.45 ng/mL;与多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的添加回收率均在64.8%-96.4%之间,变异系数<15%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。（4）基于鼠单抗mAb-FFD-BSA与包被原FFD-OVA,建立了特异性检测氟苯尼考的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法对于氟苯尼考的IC50为9.48 ng/mL,线性检测范围为1.75-51.36 ng/mL,检出限为0.64 ng/mL;与多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉、猪饲料、鸡饲料中氟苯尼考的添加回收率在88%-108%之间,变异系数<15%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。
王英存,汤晓琳,刘丹,张营,洪民华,吕智[8]（2018）在《红景天提取物应用于化妆品的生化和细胞学功效评价》文中指出通过生物化学和细胞学手段评价红景天提取物的酪氨酸酶抑制、DPPH自由基清除、黑色素抑制、抗衰老等功效。结果表明,红景天提取液体积分数为0.1%、0.5%、1%和5%时,酪氨酸酶抑制率分别为15%、48%、57%和72%;在体积分数为0.125%和0.25%时,红景天提取液的DPPH自由基的清除率达到了71%和86%;倒置显微镜细胞形态观察和黑色素含量检测表明,红景天提取物能够显着地减少小鼠B16和人G361细胞黑色素的生成;同时,红景天提取物能够显着促进1079SK成纤维细胞增殖,提高了18.93%,对皮肤1079SK成纤维细胞UVA光损伤的具有显着的保护作用;0.05 g/L的红景天提取物能够显着促进Ha Cat细胞ATP的形成,ATP相对地增加了19%。这说明,红景天具有美白、抗衰老、抗氧化以及促进皮肤表皮细胞活性等功效,在日用化妆品中有很大的应用和开发价值。
白雪莲[9]（2018）在《冬虫夏草水提液对顺铂增效减毒及体外对A375细胞作用研究》文中进行了进一步梳理冬虫夏草是是一种极其名贵的药用真菌。由于其自身特性和特殊的生长环境,导致自然资源十分稀少,乱采滥挖的现象更加剧了资源匮乏,而市场需求却不断增加,因此寻找合适的替代品成为研究的重点。广东东阳光有限公司经过10年的研发实现了冬虫夏草的产业化繁育技术。该技术所培育的冬虫夏草水提液经过鉴定有着不低于野生冬虫夏草的理化特性,说明冬虫夏草水提液有成为野生冬虫夏草替代品的可能。首先,本课题组对冬虫夏草水提液体外抗肿瘤作用和体内联合顺铂（DDP）用药对Lewis移植小鼠模型增效减毒的作用进行研究。其次,本课题组对AECS和DDP联合用药增效减毒作用机制进行研究。最后,在斑马鱼模型中进一步探究联合用药的增效减毒性作用。结果发现,冬虫夏草水提液在体外对多种肿瘤细胞具有显着的抗肿瘤作用。AECS通过抑制肿瘤生长从而提高DDP抗肿瘤活性,延长了小鼠生存时间,并减轻由于DDP引起Lewis移植瘤模型肝肾毒性作用,同时在Lewis移植瘤模型中发现伴随着NFκB和AKT/MMP2/MMP9通路的减弱。此外,在A549移植瘤斑马鱼模型中,与DDP组比较,联合治疗组也减轻了由于化疗药物引起的斑马鱼毒性。这些结果表明,AECS与DDP联合用药是一种可以提高以DDP为基础的化疗疗效并且能够减少由于DDP治疗引起肝肾毒性的新型治疗方式,可能与抑制NF-κB/IκBα和AKT/MMP2/MMP9通路有关。为了研究冬虫夏草水提液体外抗肿瘤作用机制。首先对肿瘤细胞增殖的影响进行研究,通过MTT法检测冬虫夏草水提液对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖能力的影响;克隆形成实验检测其对A375细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测冬虫夏草水提液对人恶性黑色素瘤A375细胞周期分布的影响。然后对恶性黑色素瘤细胞的侵袭迁移能力的影响进行探究。通过划痕实验检测冬虫夏草水提液对A375细胞迁移能力的影响;通过黏附实验检测对A375细胞黏附能力的影响;transwell小室实验检测对A375细胞迁移和侵袭能力的影响;采用western blot法检测对A375细胞中MMP-2、p-AKT、MMP-9、Bcl-2、Bax、CyclinE、CDK2及CDK4蛋白表达的影响。结果发现冬虫夏草水提液能够显着抑制A375细胞的增殖和克隆形成的能力,并且可以将A375细胞阻滞在S期。而划痕实验和transwell实验结果则说明冬虫夏草水提液对A375细胞的迁移和侵袭能力有抑制作用,黏附实验结果说明A375细胞黏附能力受冬虫夏草水提液影响。Western blot 结果显示 MMP-9、p-AKT、MMP-2、Bcl-2、CyclinE、CDK2、CDK4蛋白表达减少;Bax、P21蛋白表达增加。以上结果说明冬虫夏草水提液能显着抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖及侵袭迁移能力,其作用机制可能与阻滞细胞周期调控周期相关蛋白、激活AKT/MMP-2/MMP-9通路及调控MMPs家族蛋白及p-AKT蛋白的表达有关。
王梓淞[10]（2017）在《基于单克隆抗体特异性敲除技术的栀子苷与栀子改善HUVEC细胞氧化应激损伤作用的相关性研究》文中研究说明目的通过制备栀子苷单克隆抗体免疫亲和色谱柱,实现对栀子提取液中的栀子苷进行特异性敲除,探讨桅子苷与栀子在内皮细胞氧化应激损伤保护作用方面的相关性。1.合成栀子苷人工抗原,制备栀子苷单克隆抗体,纯化单克隆抗体蛋白。2.利用栀子苷单克隆抗体建立栀子苷酶联免疫分析法,考察该方法的精密度、加样回收率,并进行复方中栀子苷含量的测定。3.制备栀子苷单克隆抗体免疫亲和色谱柱,优化色谱柱的工作条件,实现对栀子提取液中栀子苷的特异性敲除。4.探讨栀子苷及不同栀子苷含量的栀子提取液对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化应激损伤保护作用的药效关联性,分析栀子苷对栀子的药效影响。方法1.选用高碘酸钠氧化法合成栀子苷人工抗原,动物免疫后检测血清抗体,进行脾细胞与骨髓瘤细胞的融合,筛选阳性杂交瘤细胞,单克隆化培养后,腹水诱导法量产抗体,辛酸法纯化抗体蛋白,对纯化后抗体进行效价和特异性检测。2.棋盘法检测包被原和一抗的最佳工作浓度,建立栀子苷单克隆抗体的酶联免疫分析法,考察该方法的精密度和加样回收率,与HPLC法检测结果进行相关性分析,检测不同配伍含栀子处方中的栀子苷含量。3.利用纯化后的栀子苷单克隆抗体,将其偶联到活化后的琼脂糖凝胶上,制备栀子苷单克隆抗体免疫亲和色谱柱,优化筛选孵育时间、敲除缓冲液和洗脱缓冲液及各缓冲液的流速,考察色谱柱的偶联率、柱容量,建立对栀子提取液中栀子苷敲除样品的液相图谱,具体条件如下:安捷伦 1260 infinity,Agilent ZORBAX-C18 柱,柱温 30℃,1ml/min流速,10μl/针进样量,流动相0.1%磷酸水溶液（A）-乙腈（C）,梯度条件0-37min,95%（A）5%（C）;37-60min,85%（A）15%（C）;60-65min,70%（A）30%（C）;65-70min,95%（A）5%（C）。4.以H202诱导的HUVEC氧化应激损伤模型为载体,通过特异性敲除及定量回填栀子苷的方法,进行栀子苷及不同桅子苷含量的栀子提取液对H202诱导的HUVEC氧化应激损伤细胞活力及NO、NOS、SOD、GSH-px等氧化应激相关指标的药效关联研究。结果1.栀子苷人工抗原合成成功,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法（MALDI-TOF-MS）检测并计算得出栀子苷与BSA的偶联比约为34:1.经细胞融合筛选成功制备了能分泌栀子苷单克隆抗体的杂交瘤细胞株,SDS-PAGE结果显示经纯化除去了腹水中的大量杂蛋白,获得了较高纯度的栀子单克隆抗体,纯化前后腹水中的抗体效价均为1:60000左右。抗抗体与其结构类似物、桅子中其他主要药物成分、常配伍的中药化合物均无明显交叉反应,具有良好的特异性。2.建立了该栀子苷单克隆抗体的酶联免疫分析法,线性检测范围大致是1μg/mL-50μg/mL,线性回归方程为 Y=-0.158ln（x）+0.9392,R2=0.9912。IC50 值（即半数抑制浓度）为6.115μg/mL,最低检测限约为258 ng/mL。检测结果与HPLC法的检测结果相关性好,R2=0.9982。该方法的板内差变异系数和板间差变异系数均在15%以内,平均加样回收率为101.51%,符合生物样品检测的需求。3.制备了栀子苷单克隆抗体免疫亲和色谱柱,确定以去离子水作为敲除缓冲液,孵育时间设定为60min,敲除液流速为1ml/min,0.1M的甘氨酸-盐酸缓冲液作为洗脱液,洗脱液流速为2ml/min的反应体系作为该栀子苷免疫亲和色谱柱的最适工作条件。抗体蛋白偶联率为87.3%,抗体蛋白与柱体的偶联比为5.74mg/ml,柱体的容量约为3.25μg/ml。成功建立了栀子苷的敲除方法,制备了特异性敲除栀子苷的栀子提取液样品。4.通过500μmol/l H202诱导HUVEC 12h建立氧化应激损伤模型,以栀子苷及含有50%、100%、150%、200%栀子苷的栀子提取液分别干预。结果显示,氧化应激损伤使HUVEC细胞存活率下降至54.037%,细胞培养基中NO含量由36.97pmol/l降至19.86μmol/l,细胞的 NOS、SOD、GSH-px 活性分别由 3.07U/mgprot、37.48U/mgprot、217.40U/mgprot 降至 1.39U/mgprot、23.18U/mgprot、110.87U/mgprot。较之 H2O2模型组,栀子苷以及50%、100%、150%、200%栀子苷含量的栀子提取液均能不同程度地提高细胞存活率,增加培养基中NO含量及NOS、SOD、GSH-px活性,差异有统计学意义（P<0.05）。并且在50%、100%、150%栀子苷三组中,随着栀子苷含量的升高,细胞存活率不同程度升高,NO含量及NOS、SOD、GSH-px活性不同程度增加,差异有统计学意义（P<0.05）。虽然50%栀子苷组的NOS和SOD活性较100%栀子苷组无明显统计学差异（P>0.05）,但数值上活性有下降趋势。200%栀子苷组的细胞存活率、NO含量及NOS活性与150%栀子苷组相比没有明显统计学差异（P>0.05）,SOD及GSH-px活性较150%栀子苷组明显下降（P<0.05）,继续增加栀子苷含量不能进一步提高氧化应激的保护作用。结论本研究制备的栀子苷单克隆抗体具有较强的特异性与亲和力,基于该单克隆抗体建立的酶联免疫分析法在检测结果上与传统高效液相法的检测结果相关性良好,可以用于相关样品中栀子苷的含量测定。在此基础上制备的栀子苷单克隆抗体免疫亲和色谱柱,能够实现栀子提取液中栀子苷成分的特异性敲除。进一步的药效关联性研究结果显示,栀子苷及不同栀子苷含量的栀子提取液对内皮细胞氧化应激损伤都有不同程度的保护作用,且随着栀子苷含量的增多,氧化应激保护作用有不同程度的增强,表明栀子苷与栀子在内皮细胞氧化应激保护作用上存在一定的药效关联性,对栀子的药效发挥有重要影响。
二、酚液对瘤细胞的作用和毒性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、酚液对瘤细胞的作用和毒性（论文提纲范文）
（1）农产品典型真菌毒素生物识别材料与快速检测方法研究（论文提纲范文）
| 附件 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 食品中真菌毒素研究现状 |
| 1.1.1 毒性 |
| 1.1.2 限量 |
| 1.1.3 常规检测方法 |
| 1.2 真菌毒素生物传感分析技术及研究进展 |
| 1.2.1 识别元件 |
| 1.2.2 纳米材料与纳米结构用于信号响应及信号放大 |
| 1.2.3 真菌毒素的生物传感检测方法 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 1.4 本课题的主要研究内容 |
| 1.5 本课题的技术路线 |
| 第二章 基于单抗的光学与气压生物传感方法研究 |
| 第一节 伏马毒素单克隆抗体研制与灰度成像快速检测技术研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 实验仪器及耗材 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 融合用细胞、实验动物及器材 |
| 2.2.4 主要溶液与培养基的配制 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 伏马毒素B_1完全抗原的合成 |
| 2.3.2 伏马毒素B_1的动物免疫与杂交瘤细胞的制备 |
| 2.3.3 伏马毒素B_1抗原免疫效果评价 |
| 2.3.4 伏马毒素B_1阳性杂交瘤筛选方法 |
| 2.3.5 伏马毒素B_1抗体的生产 |
| 2.3.6 伏马毒素B_1抗体的特异性鉴定 |
| 2.3.7 伏马毒素B_1的酶联免疫吸附方法的建立 |
| 2.3.8 伏马毒素B_1的酶联免疫方法标准曲线的建立 |
| 2.3.9 纳米金探针的制备 |
| 2.3.10 伏马毒素B_1灰度成像纳米金试纸条的原理 |
| 2.3.11 灰度成像纳米金试纸条标准曲线的建立 |
| 2.3.12 灰度成像纳米金试纸条的检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 伏马毒素B_1抗原的免疫学鉴定 |
| 2.4.2 伏马毒素B_1杂交瘤细胞的筛选结果 |
| 2.4.3 伏马毒素B_1单克隆抗体7A11的特异性鉴定 |
| 2.4.4 伏马毒素B_1的ic ELISA条件的优化 |
| 2.4.5 伏马毒素B_1灰度成像方法的建立 |
| 2.4.6 伏马毒素B_1灰度成像方法与ic ELISA方法评价 |
| 第二节 基于单抗的真菌毒素与其他危害物同步检测技术研究 |
| 2.5 引言 |
| 2.6 材料 |
| 2.6.1 实验仪器及耗材 |
| 2.6.2 主要试剂及溶液 |
| 2.6.3 融合用细胞、实验动物及器材 |
| 2.6.4 主要溶液与培养基的配制 |
| 2.7 方法 |
| 2.7.1 甲萘威、克百威杂交瘤细胞制备 |
| 2.7.2 甲萘威、克百威阳性杂交瘤筛选 |
| 2.7.3 甲萘威、克百威单抗制备与纯化 |
| 2.7.4 Eu/Tb(Ⅲ)标记探针的制备 |
| 2.7.5 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法建立 |
| 2.7.6 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法原理 |
| 2.7.7 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法评价 |
| 2.8 结果 |
| 2.8.1 甲萘威、克百威杂交瘤筛选结果 |
| 2.8.2 甲萘威、克百威单克隆抗体特性表征 |
| 2.8.3 Eu/Tb(Ⅲ)纳米探针的表征 |
| 2.8.4 样品前处理方法 |
| 2.8.5 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法的优化 |
| 2.8.6 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法特异性评价 |
| 2.8.7 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法定量曲线 |
| 2.8.8 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法回收率和实际样品检测 |
| 第三节 二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体研制与气压法免疫传感方法研究 |
| 2.9 引言 |
| 2.10 材料 |
| 2.10.1 实验仪器及耗材 |
| 2.10.2 实验试剂 |
| 2.10.3 融合用细胞、实验动物及器材 |
| 2.10.4 主要溶液与培养基的配制 |
| 2.11 方法 |
| 2.11.1 二乙酰镳草镰刀菌烯醇完全抗原的合成 |
| 2.11.2 二乙酰镳草镰刀菌烯醇动物免疫与杂交瘤细胞的制备 |
| 2.11.3 二乙酰镳草镰刀菌烯醇阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 2.11.4 二乙酰镳草镰刀菌烯醇单抗制备与纯化 |
| 2.11.5 铂金纳米仿生催化材料与识别探针的合成 |
| 2.11.6 气压免疫传感器的构建 |
| 2.11.7 气压免疫传感检测体系的优化 |
| 2.11.8 小麦样品的前处理 |
| 2.11.9 免疫气压法实际样品应用 |
| 2.11.10 高效液相色谱质谱联用法检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇 |
| 2.12 结果 |
| 2.12.1 二乙酰镳草镰刀菌烯醇免疫效果与杂交瘤细胞研制 |
| 2.12.2 铂金纳米仿生催化材料与识别探针的鉴定 |
| 2.12.3 电化学方法对铂金纳米仿生催化材料催化活性的鉴定 |
| 2.12.4 铂金纳米催化材料探针标记条件的优化 |
| 2.12.5 免疫气压传感检测原理 |
| 2.12.6 免疫气压传感检测条件优化 |
| 2.12.7 免疫气压传感特异性 |
| 2.12.8 免疫气压传感回收率测定 |
| 2.12.9 免疫气压传感的应用 |
| 2.13 讨论 |
| 2.13.1 伏马毒素B_1与二乙酰镳草镰刀菌烯醇两种毒素半抗原设计与合成 |
| 2.13.2 真菌毒素单克隆抗体的研制 |
| 2.13.3 灰度成像纳米金免疫层析技术 |
| 2.13.4 气压免疫传感器的设计与条件优化 |
| 2.14 小结 |
| 第三章 基于纳米抗体无毒替代抗原传感分析方法研究 |
| 第一节 黄曲霉毒素M_1纳米抗体研制与丝网印刷电化学传感方法研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料 |
| 3.2.1 实验仪器及耗材 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.2.3 实验溶液 |
| 3.2.4 引物 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 免疫羊驼与血清效价测定 |
| 3.3.2 总RNA的提取 |
| 3.3.3 cDNA第一链合成 |
| 3.3.4 重链可变区基因片段扩增 |
| 3.3.5 纳米抗体基因与pComb3X质粒的酶切与连接 |
| 3.3.6 重组的噬菌粒电转 |
| 3.3.7 纳米抗体文库的库容量与多样性鉴定 |
| 3.3.8 噬菌体展示文库的构建与滴度测定 |
| 3.3.9 噬菌体展示纳米抗体文库的构建 |
| 3.3.10 阳性纳米抗体竞争筛选和富集 |
| 3.3.11 阳性纳米抗体的鉴定 |
| 3.3.12 纳米抗体的表达与纯化 |
| 3.3.13 纳米抗体的特性鉴定 |
| 3.3.14 黄曲霉毒素M_1免疫传感器的构建 |
| 3.3.15 工作电极修饰的表征方法 |
| 3.3.16 无毒替代抗原免疫传感方法条件优化 |
| 3.3.17 免疫传感标准曲线与加标回收 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 羊驼血总RNA的提取与重链基因扩增 |
| 3.4.2 纳米抗体片段和载体pComb3X酶切鉴定 |
| 3.4.3 噬菌体纳米抗体文库的多样性鉴定 |
| 3.4.4 阳性噬菌体的筛选 |
| 3.4.5 阳性噬菌体的鉴定 |
| 3.4.6 纳米抗体VHH4-1-1和VHH2-3-1 的表达 |
| 3.4.7 纳米抗体VHH4-1-1和VHH2-3-1 特异性测定 |
| 3.4.8 丝网印刷碳电极检测原理 |
| 3.4.9 工作电极的修饰与电极表征 |
| 3.4.10 免疫电极的制备及工作条件优化 |
| 3.4.11 电化学传感器特异性、稳定性与准确度评价 |
| 第二节 基于无毒抗原AFB_1与ZEN时间分辨荧光混合污染检测技术 |
| 3.5 引言 |
| 3.6 材料 |
| 3.6.1 实验仪器及耗材 |
| 3.6.2 主要试剂 |
| 3.7 实验步骤 |
| 3.7.1 纳米抗体phages2-5和phages8#的纯化 |
| 3.7.2 Eu/Tb(Ⅲ)纳米颗粒探针的合成与鉴定 |
| 3.7.3 两种竞争模式的建立与优化 |
| 3.7.4 基于无毒替代抗原混合毒素时间分辨同步检测方法优化 |
| 3.8 结果与讨论 |
| 3.8.1 Eu/Tb(Ⅲ)纳米颗粒与探针的鉴定 |
| 3.8.2 Eu/Tb(Ⅲ)纳米探针偶联条件优化 |
| 3.8.3 两种竞争模式的结果比对 |
| 3.8.4 时间分辨荧光多毒素同步检测技术原理 |
| 3.8.5 基于无毒替代抗原时间分辨荧光检测技术准确度、重复性评价 |
| 3.8.6 玉米实际样品的检测 |
| 3.9 讨论 |
| 3.9.1 抗独特型纳米抗体替代抗原用于电化学免疫传感器 |
| 3.9.2 抗独特型纳米抗体替代抗原用于时间分辨荧光免疫层析技术 |
| 3.10 小结 |
| 第四章 基于适配体展青霉素侧向层析分析方法研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料 |
| 4.2.1 实验仪器及耗材 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 主要溶液 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 适配体序列及前处理方法 |
| 4.3.2 适配体试纸条的制备 |
| 4.3.3 适配体试纸条原理 |
| 4.3.4 适配体试纸条的检测步骤 |
| 4.3.5 适配体的选择 |
| 4.3.6 适配体检测模式的选择 |
| 4.3.7 适配体浓度的优化 |
| 4.3.8 适配体试纸条条件优化 |
| 4.3.9 适配体检测缓冲液条件优化 |
| 4.3.10 适配体试纸条方法的鉴定 |
| 4.3.11 适配体试纸条检测样品前处理 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 适配体与竞争模式的选择 |
| 4.4.2 生物素-适配体与地高辛-互补链的浓度优化 |
| 4.4.3 适配体试纸条条件优化 |
| 4.4.4 适配体检测缓冲液配方优化 |
| 4.4.5 适配体试纸条的性能参数评价 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 三类生物识别材料用于农产品快速检测的性能比较 |
| 5.1 系列生物识别材料的研制 |
| 5.1.1 两种展青霉素适配体的比对结果 |
| 5.1.2 四类单克隆抗体的筛选结果 |
| 5.1.3 四种单抗与国内外报道同类抗体特性进行比较 |
| 5.1.4 抗独特型纳米抗体的筛选结果 |
| 5.1.5 适配体、单抗、纳抗的研制比较 |
| 5.2 系列生物传感器的开发 |
| 5.2.1 建立的生物传感器涉及到的农产品类别 |
| 5.2.2 建立的生物传感器固定化技术的选择 |
| 5.2.3 建立的生物传感器识别元件的选择 |
| 5.2.4 检测方法的选择 |
| 5.3 农产品中生物传感器发展趋势展望 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 水蛭提取液的制备和主要成分分析的初步研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 主要试剂和耗材 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 试剂配制 |
| 1.2 实验方法与步骤 |
| 1.2.1 水蛭提取液的制备和含量检测 |
| 1.2.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液成分 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 水蛭提取液的制备和水蛭素含量测定 |
| 1.3.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液主要成 |
| 1.4 讨论 |
| 1.4.1 水蛭提取液的制备和检测的初步研究 |
| 1.4.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液成分 |
| 第二部分 水蛭提取液对WERI-Rb-1 细胞活性、周期、凋亡、侵袭的影响 |
| 2.1 实验细胞、试剂及配制、仪器设备和耗材 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 2.1.3 主要实验设备仪器 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.2 细胞培养、传代和冻存 |
| 2.2.1 细胞培养和传代 |
| 2.2.2 细胞冻存 |
| 2.3 实验方法与步骤 |
| 2.3.1 CCK-8法检测水蛭提取液对细胞的活性影响 |
| 2.3.2 水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞周期的影响 |
| 2.3.3 水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞凋亡的影响 |
| 2.3.4 水蛭提取液对 WERI-RB-1 侵袭能力的影响 |
| 2.4 统计分析 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 不同浓度药物对WER-Rb-1细胞活性的影响 |
| 2.5.2 流式细胞技术检测药物对细胞周期的影响 |
| 2.5.3 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞凋亡的影响 |
| 2.5.4 transwell 实验检测水蛭提取液对 WER-Rb-1 细胞侵袭能力的影响 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞活性的影响 |
| 2.6.2 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞周期的影响 |
| 2.6.3 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞凋亡影响 |
| 2.6.4 细胞凋亡与增殖 |
| 2.6.5 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞侵袭能力的影响 |
| 第三部分 水蛭提取液对WER-Rb-1 细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究 |
| 3.1 实验细胞、试剂、耗材和仪器设备 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 3.1.3 主要实验设备仪器 |
| 3.2 实验方法与步骤 |
| 3.2.1 Elisa 实验检测水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞表达 VEGF 的影响 |
| 3.2.2 HIF-1a、MMP-9、VEGFR2 的实时定量RT-PCR检测 |
| 3.2.3 Western Blot法检测HIF-1a、MMP-9、PI3K、p-AKT蛋白表达 |
| 3.3 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Elisa 检测培养基上清中 VEGF 蛋白的表达 |
| 3.4.2 HIF-1a基因表达 |
| 3.4.3 MMP-9基因表达 |
| 3.4.4 Western Blot 检测各组 PI3K 和 p-AKT 蛋白的表达 |
| 3.4.5 Western Blot 检测各组 HIF-1a 和 MMP-9 蛋白的表达 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 VEGF、HIF-1a和 MMP-9 在肿瘤生成中的作用 |
| 3.5.2 PI3K/AKT信号通路在肿瘤疾病中的作用 |
| 3.5.3 水蛭素通过VEGF/PI3K/AKT通路及HIF-1a、MMP-9 因子抑制RB细胞 |
| 第四部分 水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响 |
| 4.1 实验细胞、试剂和仪器设备 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 主要实验试剂 |
| 4.1.3 主要实验设备仪器 |
| 4.2 实验方法与步骤 |
| 4.2.1 CCK-8法检水蛭提取液对测细胞活性的影响 |
| 4.2.2 RT- PCR 检测 VEGF 和 VEGFR2 基因表达 |
| 4.2.3 Western Blot法检测VEGF、VEGFR2 的蛋白表达 |
| 4.3 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 CCK-8法检水蛭提取液对测细胞活性及抑制率的影响 |
| 4.4.2 VEGFR2基因表达 |
| 4.4.3 VEGF基因表达 |
| 4.4.4 水蛭提取液对 HUVEC 细胞表达 VEGF 和 VEGFR2 蛋白的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 VEGF和 VEGFR2对血管生成的调控 |
| 4.5.2 水蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和 VEGFR2的影响 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件 1 文献综述 水蛭的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件二 文献综述 视网膜母细胞瘤的生物标志物 |
| 参考文献 |
| 附件3 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 附件4 倒置显微镜下细胞形态 |
（3）富硒绿豆发酵液面膜的研发和富硒黑茶的活性初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 生物发酵 |
| 1.2.1 生物发酵技术的定义 |
| 1.2.2 生物发酵护肤品的研究现状 |
| 1.3 硒 |
| 1.3.1 硒元素简介 |
| 1.3.2 硒元素的生理功能 |
| 1.3.3 硒元素的美容护肤功效 |
| 1.4 绿豆 |
| 1.4.1 绿豆简介 |
| 1.4.2 绿豆的美容护肤功效 |
| 1.5 黑茶 |
| 1.5.1 黑茶简介 |
| 1.5.2 黑茶的美容护肤功效 |
| 1.6 护肤品的功效评价方法 |
| 1.6.1 体外功效评价方法 |
| 1.6.2 体内功效评价方法 |
| 1.7 本文的研究目的及意义、内容 |
| 1.7.1 本文的研究目的及意义 |
| 1.7.2 本文的主要研究内容 |
| 第2章 富硒绿豆发酵液的制备及其活性测定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 富硒绿豆发酵液的制备 |
| 2.3.2 富硒绿豆发酵液的有效成分含量分析 |
| 2.3.3 富硒绿豆发酵液游离氨基酸组成分析与γ-氨基丁酸含量测定 |
| 2.3.4 富硒绿豆发酵液蛋白质水解氨基酸组成测定 |
| 2.3.5富硒绿豆发酵液的自由基清除实验 |
| 2.3.6 富硒绿豆发酵液对酪氨酸酶活性的抑制作用 |
| 2.3.7 富硒绿豆发酵液对小鼠黑色素瘤细胞中黑色素形成的影响 |
| 2.3.8 富硒绿豆发酵液对成纤维细胞中保湿相关基因的影响 |
| 2.3.9 统计学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 富硒绿豆发酵液中有效成分含量 |
| 2.4.2 富硒绿豆发酵液游离氨基酸组成分析与γ-氨基丁酸含量 |
| 2.4.3 富硒绿豆发酵液蛋白质水解氨基酸组成分析 |
| 2.4.4 富硒绿豆发酵液的自由基清除率 |
| 2.4.5 富硒绿豆发酵液的酪氨酸酶抑制率 |
| 2.4.6 富硒绿豆发酵液对细胞中黑色素生成的影响 |
| 2.4.7 富硒绿豆发酵液对HFF-1 细胞内保湿基因生成的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 富硒绿豆发酵液的安全性评价 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和实验动物 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 富硒绿豆发酵液中重金属含量测定 |
| 3.3.2 皮肤刺激性试验 |
| 3.3.3 急性眼刺激性试验 |
| 3.3.4 皮肤变态反应试验 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 富硒绿豆发酵液的重金属含量测定 |
| 3.4.2 皮肤刺激性试验 |
| 3.4.3 急性眼刺激性试验 |
| 3.4.4 皮肤变态反应试验 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 富硒绿豆发酵液护肤功效的人体评价 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 富硒绿豆发酵液面膜的配置 |
| 4.3.2 受试者筛选 |
| 4.3.3 富硒绿豆发酵液面膜抗衰、美白和保湿功效人体测定 |
| 4.3.4 统计学分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 富硒绿豆发酵液面膜的抗衰功效 |
| 4.4.2 富硒绿豆发酵液面膜的美白功效 |
| 4.4.3 富硒绿豆发酵液面膜的保湿功效 |
| 4.4.4 富硒绿豆发酵液面膜受试者面部分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 富硒黑茶的活性初探 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 实验设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 富硒黑茶提取物的制备 |
| 5.3.2 富硒黑茶提取物中硒含量的测定 |
| 5.3.3 富硒黑茶提取物中茶多糖含量的测定 |
| 5.3.4 富硒黑茶提取物中总酚含量的测定 |
| 5.3.5 富硒黑茶提取物中黄酮含量的测定 |
| 5.3.6 富硒黑茶提取物中茶色素含量的测定 |
| 5.3.7 富硒黑茶提取物的自由基清除率 |
| 5.3.8 富硒黑茶提取物的细胞抗氧化作用 |
| 5.3.9 富硒黑茶提取物的抑菌活性 |
| 5.3.10 富硒黑茶提取物中重金属含量的测定 |
| 5.3.11 富硒黑茶提取物的安全性评价 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 富硒黑茶提取物中有效成分的含量 |
| 5.4.2 富硒黑茶提取物的自由基清除率 |
| 5.4.3 富硒黑茶提取物的细胞抗氧化作用 |
| 5.4.4 富硒黑茶提取物的抑菌作用 |
| 5.4.5 富硒黑茶提取物的重金属含量 |
| 5.4.6 富硒黑茶提取物的安全性评价 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（4）基于光学疗法的多功能纳米载药体系靶向口腔鳞状细胞癌的协同作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 第一部分 ROS响应性纳米载药体系联合光动力与化疗靶向治疗舌鳞状细胞癌CAL-27的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 主要仪器设备 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 RPTD偶联物化学结构的表征 |
| 1.2.2 纳米载药体系粒径和形貌的表征 |
| 1.2.3 纳米载药体系光动力性能的表征 |
| 1.2.4 RPTD/HP纳米粒子体外肿瘤细胞靶向性能的考察 |
| 1.2.5 RPTD/HP纳米载药体系ROS响应性能的考察 |
| 1.2.6 纳米粒子联合激光照射引发细胞内ROS水平变化的考察 |
| 1.2.7 线粒体损伤和Cytc释放的检测 |
| 1.2.8 化疗对CAL-27细胞周期阻滞作用的评价 |
| 1.2.9 纳米粒子联合激光照射对CAL-27细胞毒性作用的考察 |
| 1.2.10 纳米粒子联合激光照射对CAL-27细胞凋亡的影响 |
| 1.2.11 纳米载药体系体内肿瘤靶向性能的考察 |
| 1.2.12 纳米载药体系联合激光照射对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 RPTD/HP纳米载药体系的制备和表征 |
| 1.3.2 RPTD/HP纳米载药体系联合激光照射对CAL-27 细胞体外生长的抑制作用 |
| 1.3.3 RPTD/HP纳米粒子联合激光照射对荷瘤小鼠体内肿瘤生长的抑制作用 |
| 1.4 小结 |
| 第二部分 同源肿瘤靶向的仿生纳米载药体系联合光热与Nrf2-siRNA优化的光动力疗法共同对抗舌鳞状细胞癌SCC-25的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 纳米载药体系粒径和形貌的表征 |
| 2.2.2 Nrf2-siRNA和 CCM对 PPI纳米粒子修饰效果的表征 |
| 2.2.3 纳米载药体系体外稳定性和载药情况的表征 |
| 2.2.4 纳米载药体系体外光热/光动力性能的考察 |
| 2.2.5 M@PPI-siRNA纳米粒子体外同源肿瘤靶向性能的评价 |
| 2.2.6 Cy3-siRNA亚细胞分布情况的考察 |
| 2.2.7 对M@PPI-siRNA纳米载药体系在细胞水平光热性能的考察 |
| 2.2.8 对M@PPI-siRNA纳米载药体系在细胞水平光动力性能的考察 |
| 2.2.9 纳米粒子联合激光照射对SCC-25细胞体外生长抑制作用的评价 |
| 2.2.10 M@PPI-siRNA纳米粒子体内同源肿瘤靶向性能的考察 |
| 2.2.11 M@PPI-siRNA纳米粒子体内光热/光动力性能的考察 |
| 2.2.12 纳米载药体系联合激光照射对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 M@PPI-siRNA纳米载药体系的制备和表征 |
| 2.3.2 M@PPI-siRNA纳米粒子联合激光照射对OSCC体内外生长抑制作用的评价 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 光动力疗法的抗肿瘤机制及光敏剂的研究进展 |
| 1 前言 |
| 2 光动力反应的基本原理 |
| 3 PDT的抗肿瘤机制 |
| 4 光敏剂的发展及修饰 |
| 5 小结 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）乌骨鸡黑色素含量测定及黑色素细胞裂解液活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 黑色素的简介 |
| 1.2 黑色素的合成 |
| 1.3 黑色素结构 |
| 1.3.1 红外光谱(Infrared spectra analysis,IR) |
| 1.3.2 质谱(Mass spectrum,MS) |
| 1.3.3 热解-气相色谱-质谱(Py-GC-MS) |
| 1.3.4 电子顺磁共振(Electron paramagnetic resonance,EPR) |
| 1.3.5 紫外光谱(Ultraviolet and visible spectrophotometry,UV) |
| 1.4 黑色素的测定方法 |
| 1.4.1 称重法 |
| 1.4.2 紫外分光光度法 |
| 1.4.3 高效液相法测定黑色素含量 |
| 1.4.4 荧光分析法 |
| 1.5 乌骨鸡黑色素研究进展 |
| 1.5.1 乌骨鸡黑色素的简介 |
| 1.5.2 乌骨鸡黑色素的结构与理化特性 |
| 1.5.3 乌骨鸡黑色素的沉积 |
| 1.5.4 乌骨鸡黑色素的生理功能 |
| 1.6 乌骨鸡黑色素的测定 |
| 1.7 炎症 |
| 1.7.1 炎症简介 |
| 1.7.2 脂多糖(LPS)诱导炎症的进展 |
| 1.7.3 炎症介质 |
| 1.7.4 常用炎症模型 |
| 1.8 氧化应激 |
| 1.9 血管内皮细胞 |
| 1.10 氧化应激对内皮细胞功能的损伤 |
| 1.10.1 对内皮细胞通透性的改变 |
| 1.10.2 氧化应激对内皮依赖性血管收缩舒张功能的影响 |
| 1.11 黑色素细胞的生成以及生理功能 |
| 1.11.1 黑色素细胞的生成 |
| 1.11.2 黑色素细胞生理功能 |
| 1.12 主要研究内容 |
| 1.13 本研究的创新性 |
| 第2章 H_2O_2 氧化-荧光分析法测定乌骨鸡中黑色素含量的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 2.2.3 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 乌骨鸡黑色素工作标准品的制备 |
| 2.3.2 乌骨鸡黑色素激发波长和发射波长的测定 |
| 2.3.3 建立标准曲线 |
| 2.3.4 过氧化氢浓度对氧化反应的影响 |
| 2.3.5 氧化温度对氧化反应的影响 |
| 2.3.6 氧化时间对氧化反应的影响 |
| 2.3.7 Na OH浓度对氧化反应的影响 |
| 2.3.8 样品超声温度对氧化反应的影响 |
| 2.3.9 样品超声时间对氧化反应的影响 |
| 2.3.10 乌骨鸡黑色素的测定 |
| 2.3.11 方法检出限的测定与计算 |
| 2.3.12 数据统计分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 乌骨鸡黑色素激发波长和发射波长 |
| 2.4.2 过氧化氢浓度对氧化反应的影响 |
| 2.4.3 氧化温度对氧化反应的影响 |
| 2.4.4 氧化时间对氧化反应的影响 |
| 2.4.5 乌骨鸡样品前处理条件对黑色素氧化反应的影响 |
| 2.4.6 线性回归分析及检测限 |
| 2.4.7 稳定性和精密度 |
| 2.4.8 加标回收实验 |
| 2.4.9 乌骨鸡黑色素含量分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第3章 H_2O_2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 3.2.3 仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 细胞培养 |
| 3.3.2 MTT法测定细胞活性 |
| 3.3.3 标准曲线制作 |
| 3.3.4 乌骨鸡黑色素激发波长和发射波长的测定 |
| 3.3.5 过氧化氢浓度对氧化反应的影响 |
| 3.3.6 时间对氧化反应的影响 |
| 3.3.7 细胞中黑色素的测定 |
| 3.3.8 方法检出限的测定与计算 |
| 3.3.9 统计学分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 乌骨鸡黑色素细胞形态 |
| 3.4.2 乌骨鸡黑色素激发波长和发射波长 |
| 3.4.3 过氧化氢浓度对氧化反应的影响 |
| 3.4.4 氧化时间对氧化反应的影响 |
| 3.4.5 线性回归分析及检测限 |
| 3.4.6 精密度和重复性 |
| 3.4.7 加标回收实验 |
| 3.4.8 IBMX对乌骨鸡黑色素细胞增殖的影响 |
| 3.4.9 IBMX对乌骨鸡黑色素细胞合成黑色素的含量的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 BMCL对 LPS诱导的RAW264.7 细胞抗炎作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 4.2.3 仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 RAW264.7 细胞的培养 |
| 4.3.2 乌骨鸡黑色素细胞的培养以及BMCL的制备 |
| 4.3.3 实验分组 |
| 4.3.4 MTT法 |
| 4.3.5 测定RAW264.7 细胞中的NO生成量 |
| 4.3.6 不同模式下的BMCL对于RAW264.7 的NO生成量的影响 |
| 4.3.7 不同作用时间下BMCL对于RAW264.7的NO生成量的影响 |
| 4.3.8 统计学分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 BMCL对 RAW264.7 细胞毒性的评价 |
| 4.4.2 LPS对 RAW264.7 细胞毒性的影响 |
| 4.4.3 LPS对 RAW264.7 细胞NO生成量的影响 |
| 4.4.4 倒置显微镜观察不同浓度LPS对 RAW264.7 细胞形态的影响 |
| 4.4.5 不同作用模式下BMCL对细胞NO生成量的影响 |
| 4.4.6 不同作用时间下BMCL对于RAW264.7的NO生成量的影响 |
| 4.4.7 倒置显微镜观察BMCL对 RAW264.7 细胞形态的影响 |
| 4.4.8 钙、铁元素作用的BMCL对 RAW264.7 细胞NO生成量的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 BMCL对 H_2O_2 诱导的内皮细胞损伤的保护作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 |
| 5.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 5.2.3 仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 HUVEC细胞的培养 |
| 5.3.2 乌骨鸡黑色素细胞的培养 |
| 5.3.3 BMCL的提取 |
| 5.3.4 实验分组 |
| 5.3.5 MTT法 |
| 5.3.6 LDH活性测定 |
| 5.3.7 MDA含量测定 |
| 5.3.8 SOD酶活性测定 |
| 5.3.9 统计学分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 H_2O_2对HUVEC细胞形态的影响 |
| 5.4.2 H_2O_2对HUVEC细胞生长的影响 |
| 5.4.3 H_2O_2对HUVEC细胞LDH活性的影响 |
| 5.4.4 BMCL和 VC对内皮细胞增殖的影响 |
| 5.4.5 BMCL对氧化损伤的HUVEC细胞损伤的保护作用 |
| 5.4.6 BMCL对氧化损伤的HUVEC细胞培养液中LDH活性的影响 |
| 5.4.7 BMCL对氧化损伤的HUVEC细胞形态的影响 |
| 5.4.8 BMCL对氧化损伤的HUVEC细胞SOD酶活性的影响 |
| 5.4.9 BMCL对氧化损伤的HUVEC细胞培养液中MDA含量的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 第6章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 进一步研究方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（6）胡桃楸茎枝水提物的体外吸收与代谢研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 胡桃楸茎枝水提物的制备及其体外抗肿瘤活性研究 |
| 第一节 胡桃楸茎枝水提物的制备 |
| 材料与方法 |
| 实验结果与讨论 |
| 第二节 胡桃楸茎枝水提物的体外抗肿瘤活性研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 胡桃楸茎枝水提物在Caco-2 细胞模型中的吸收、代谢的成分 |
| 第一节 胡桃楸茎枝水提物对Caco-2 细胞的毒性研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果与讨论 |
| 第二节 胡桃楸茎枝水提物中化学成分的分析研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果与讨论 |
| 第三节 胡桃楸茎枝水提物在Caco-2 细胞模型中吸收、代谢的成分 |
| 材料与方法 |
| 实验结果与讨论 |
| 小结 |
| 论文三 胡桃楸茎枝水提物在外翻肠囊模型中吸收、代谢的成分 |
| 第一节 大鼠小肠吸收外翻肠囊模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 实验结果与讨论 |
| 第二节 胡桃楸茎枝水提物在外翻肠囊模型中吸收、代谢的成分 |
| 材料与方法 |
| 实验结果与讨论 |
| 小结 |
| 论文四 没食子酸和逆没食子酸在肝微粒体模型中的代谢研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（7）兽药氟苯尼考及其代谢物与甲砜霉素残留免疫分析方法的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩略表 |
| 1 前言 |
| 1.1 氯霉素类抗生素简介 |
| 1.2 氟苯尼考和甲砜霉素残留及危害 |
| 1.2.1 氟苯尼考和甲砜霉素的应用概述 |
| 1.2.2 氟苯尼考和甲砜霉素残留现状及危害 |
| 1.3 氟苯尼考与氟苯尼考胺和甲砜霉素检测技术研究进展 |
| 1.3.1 仪器检测法 |
| 1.3.2 免疫检测法 |
| 1.4 研究目的与意义 |
| 1.5 本研究的主要内容及技术路线 |
| 1.5.1 主要内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 半抗原设计及合成 |
| 2.2.2 半抗原的鉴定 |
| 2.2.3 人工抗原的合成 |
| 2.2.4 人工抗原的鉴定 |
| 2.2.5 动物免疫 |
| 2.2.6 抗血清的制备及评价 |
| 2.2.7 兔多克隆抗体的纯化 |
| 2.2.8 单克隆抗体的制备及评价 |
| 2.2.9 鼠源单克隆抗体的纯化 |
| 2.2.10 抗体-包被原组合的筛选 |
| 2.2.11 ciELISA方法的建立 |
| 2.2.12 ciELISA方法的特异性 |
| 2.2.13 ciELISA方法精密度 |
| 2.2.14 ciELISA方法稳定性 |
| 2.2.15 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 2.2.16 样品前处理及基质干扰 |
| 2.2.17 实际样品的测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 半抗原合成与鉴定 |
| 3.2 人工抗原合成与鉴定 |
| 3.3 多克隆抗体制备及纯化 |
| 3.3.1 鼠抗血清制备及评价 |
| 3.3.2 兔抗血清鉴定及纯化 |
| 3.4 单克隆抗体制备及纯化 |
| 3.4.1 单克隆抗体的制备及纯化 |
| 3.4.2 单克隆抗体评价 |
| 3.5 抗体-包被原组合的筛选 |
| 3.6 同时检测FF及TAP的ciELISA方法建立 |
| 3.6.1 棋盘法 |
| 3.6.2 工作条件的优化 |
| 3.6.3 ciELISA标准曲线的建立 |
| 3.6.4 ciELISA方法特异性 |
| 3.6.5 ciELISA方法精密度 |
| 3.6.6 ciELISA方法稳定性 |
| 3.6.7 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 3.6.8 ciELISA法样品前处理及基质干扰的消除 |
| 3.6.9 实际样品的测定 |
| 3.7 同时检测FF及FFA的ciELISA方法建立 |
| 3.7.1 棋盘法 |
| 3.7.2 工作条件的优化 |
| 3.7.3 ciELISA标准曲线的建立 |
| 3.7.4 ciELISA方法特异性 |
| 3.7.5 ciELISA方法精密度 |
| 3.7.6 ciELISA方法稳定性 |
| 3.7.7 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 3.7.8 样品前处理及基质干扰的消除 |
| 3.7.9 实际样品的测定 |
| 3.8 特异性检测FF的ciELISA方法建立 |
| 3.8.1 棋盘法 |
| 3.8.2 工作条件的优化 |
| 3.8.3 ciELISA标准曲线的建立 |
| 3.8.4 ciELISA方法特异性 |
| 3.8.5 ciELISA方法精密度 |
| 3.8.6 ciELISA方法稳定性 |
| 3.8.7 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 3.8.8 样品前处理及基质干扰的消除 |
| 3.8.9 实际样品的测定 |
| 4 讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 半抗原的设计与合成 |
| 4.1.2 免疫方法理化参数优化 |
| 4.1.3 影响ciELISA稳定性因素的分析 |
| 4.1.4 本研究免疫方法与其他免疫方法的比较 |
| 4.2 结论 |
| 4.3 创新点 |
| 4.4 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附图 |
（8）红景天提取物应用于化妆品的生化和细胞学功效评价（论文提纲范文）
| 1 实验部分 |
| 1.1 试剂与仪器 |
| 1.2 测试方法 |
| 1.2.1 体外酪氨酸酶抑制实验 |
| 1.2.2 DPPH自由基清除测试 |
| 1.2.3 细胞毒性测试 |
| 1.2.4 B16细胞黑色素抑制试验 |
| 1.2.5 细胞增殖测试 |
| 1.2.6 成纤维细胞UVA损伤的保护作用 |
| 1.2.7 ATP含量检测 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 红景天提取液对酪氨酸酶的抑制 |
| 2.2 红景天提取液对DPPH自由基清除活性效果 |
| 2.3 红景天提取物细胞毒性作用 |
| 2.4 红景天提取物对黑色素细胞黑色素的抑制作用 |
| 2.5 红景天提取液对成纤维细胞的抗衰老效果 |
| 2.6 红景天提取液对Ha Cat细胞ATP含量的影响 |
| 3 结论 |
（9）冬虫夏草水提液对顺铂增效减毒及体外对A375细胞作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 侵袭迁移对恶性黑色素瘤的影响 |
| 1.3 国内外冬虫夏草研究现状及分析 |
| 1.3.1 冬虫夏草的形态特征 |
| 1.3.2 冬虫夏草活性成分 |
| 1.3.3 冬虫夏草抗肿瘤研究现状 |
| 1.4 本课题的研究内容、目的及意义 |
| 1.4.1 课题来源 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 研究目的及意义 |
| 2 冬虫夏草水提液对顺铂增效减毒作用机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 AECS1和AECS2活性成分组成 |
| 2.3.2 对细胞存活率的影响 |
| 2.3.3 体内增强顺铂对非小细胞肺癌的抗肿瘤作用 |
| 2.3.4 体内减弱顺铂引起的肝肾毒性作用 |
| 2.3.5 对IκBα/NFκB和AKT/MMP2/MMP9通路的影响 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 冬虫夏草水提液对化疗药物用于A549斑马鱼移植瘤模型的增效减毒作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 AECS1增强顺铂对斑马鱼异种移植模型的抗肿瘤作用 |
| 3.3.2 AECS1对DDP引起斑马鱼胃肠道毒性的影响 |
| 3.3.3 AECS1对DDP引起斑马鱼神经毒性的影响 |
| 3.3.4 AECS1对酒石酸长春瑞滨引起中性粒细胞减少的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 冬虫夏草水提液对A375细胞增殖能力的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.1.1 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 冬虫夏草水提液对A375细胞的存活率的影响 |
| 4.2.2 冬虫夏草水提液对A375细胞克隆形成的影响 |
| 4.2.3 冬虫夏草水提液对A375细胞周期分布的影响 |
| 4.2.4 Western blot检测蛋白的表达结果 |
| 4.3 本章小结 |
| 5 冬虫夏草水提液对A375细胞侵袭迁移能力的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.1.1 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 划痕法检测A375细胞的迁移能力影响 |
| 5.2.2 Transwell法检测A375细胞的迁移能力影响 |
| 5.2.3 Transwell法检测A375细胞的侵袭能力影响 |
| 5.2.4 黏附检测A375细胞的黏附能力影响 |
| 5.2.5 Western blot检测相关蛋白表达结果 |
| 5.3 本章小结 |
| 6 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（10）基于单克隆抗体特异性敲除技术的栀子苷与栀子改善HUVEC细胞氧化应激损伤作用的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 栀子本草学研究 |
| 综述二 栀子的现代药理作用研究进展 |
| 综述三 中药药效物质基础研究进展 |
| 参考文献 |
| 绪论 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 栀子苷单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立 |
| 前言 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 第二章 桅子苷单克隆抗体免疫亲和色谱柱的制备及栀子提取液中栀子苷的敲除 |
| 前言 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 第三章 栀子苷及不同栀子苷含量的栀子提取液对H_2O_2诱导的HUVEC氧化应激损伤的药效关联性研究 |
| 前言 |
| 实验一 HUVEC细胞生长曲线及H_2O_2氧化应激损伤模型的建立 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 实验二 栀子苷及不同栀子苷含量的栀子提取液对H_2O_2诱导的HUVEC氧化应激损伤细胞活力的药效关联性研究 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 实验三 栀子苷及不同栀子苷含量的栀子提取液对H_2O_2诱导的HUVEC氧化应激损伤相关指标的药效关联性研究 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
四、酚液对瘤细胞的作用和毒性（论文参考文献）
- [1]农产品典型真菌毒素生物识别材料与快速检测方法研究[D]. 唐晓倩. 中国农业科学院, 2020
- [2]水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究[D]. 李园媛. 成都中医药大学, 2020(01)
- [3]富硒绿豆发酵液面膜的研发和富硒黑茶的活性初探[D]. 郭聪颖. 上海师范大学, 2020(07)
- [4]基于光学疗法的多功能纳米载药体系靶向口腔鳞状细胞癌的协同作用研究[D]. 史澍睿. 天津医科大学, 2020(06)
- [5]乌骨鸡黑色素含量测定及黑色素细胞裂解液活性研究[D]. 陈露露. 南昌大学, 2019(02)
- [6]胡桃楸茎枝水提物的体外吸收与代谢研究[D]. 鞠晓畅. 辽宁中医药大学, 2019(02)
- [7]兽药氟苯尼考及其代谢物与甲砜霉素残留免疫分析方法的研究[D]. 李然. 华南农业大学, 2018(08)
- [8]红景天提取物应用于化妆品的生化和细胞学功效评价[J]. 王英存,汤晓琳,刘丹,张营,洪民华,吕智. 日用化学品科学, 2018(03)
- [9]冬虫夏草水提液对顺铂增效减毒及体外对A375细胞作用研究[D]. 白雪莲. 哈尔滨商业大学, 2018(12)
- [10]基于单克隆抗体特异性敲除技术的栀子苷与栀子改善HUVEC细胞氧化应激损伤作用的相关性研究[D]. 王梓淞. 北京中医药大学, 2017(08)