一、肿瘤疫苗和肿瘤的免疫治疗（论文文献综述）
虞淦军,吴艳峰,曹雪涛[1]（2022）在《个性化新抗原肿瘤疫苗：道阻且长，未来可期》文中进行了进一步梳理个性化新抗原肿瘤疫苗逐渐崭露头角,在恶性黑色素瘤、肺癌、脑胶质瘤等肿瘤治疗领域取得了突破,展现了良好的应用前景。随着测序成本的降低、人工智能技术的不断突破和对肿瘤免疫理解的不断深入,对一个肿瘤患者进行全过程动态跟踪和捕捉其肿瘤相关体细胞突变的克隆多样性已成为可能,随之研发的新抗原肿瘤疫苗则成为肿瘤治疗的前沿热点,未来可期。本文从新抗原的筛选鉴定、新抗原相关的肿瘤疫苗及其临床应用现状、个性化新抗原肿瘤疫苗面临的挑战和未来发展趋势等五个方面,系统地总结了个性化新抗原肿瘤疫苗这一新兴的精准免疫治疗方法的研究脉络及进展,并对未来重点走向进行了展望。
张婷,陈娟,欧阳昭连[2]（2021）在《基于专利分析的肿瘤疫苗领域技术创新态势研究》文中进行了进一步梳理肿瘤疫苗在肿瘤免疫治疗中有巨大潜力,有效、可控和长效的肿瘤疫苗治疗将在治疗肿瘤、防止肿瘤复发、延长患者生存期及肿瘤预防方面发挥更大的作用。本研究通过全球肿瘤疫苗领域的发明专利申请与授权、技术发源地、目标市场、技术创新实体及技术创新主题等进行分析,揭示技术创新态势。研究结果显示,全球肿瘤疫苗领域共有发明专利申请5 635组,其中已获得授权的发明专利有1 839组,技术创新活跃;美国和中国是主要的技术发源地和目标市场;全球肿瘤疫苗领域的技术创新实体以企业和高校/研究所为主,德国Immatics Biotechnologies公司、日本Oncotherapy Science公司及英国葛兰素史克公司引领全球肿瘤疫苗研发;中国的技术创新实体以高校/研究所为主,但企业也开始发挥重要作用;技术创新主题聚焦于肿瘤疫苗相关的抗原研究、肿瘤免疫活性、多肽修饰技术、疫苗相关生物技术。本研究通过对全球肿瘤疫苗领域的发明专利进行分析,揭示技术创新态势,明确技术创新方向,为我国肿瘤免疫治疗研究提供信息服务支持,同时从情报学角度为技术开发提供新的研究视角。
吕芳芳[3]（2021）在《M1型巨噬细胞外泌体疫苗通过调节肿瘤微环境增强肿瘤免疫治疗作用》文中指出癌症的发病率和死亡率居高不下,对人类的生命健康造成严重影响。肿瘤的免疫治疗是继手术治疗、放疗和化疗之后出现的新型治疗方法,为彻底根除癌症带来了希望。肿瘤疫苗通过肿瘤抗原诱导机体产生针对肿瘤的特异性免疫应答,相比于其他免疫疗法具有更低的毒副作用。但是肿瘤微环境（Tumor Microenvironment,TME）存在的免疫抑制现象是导致肿瘤免疫治疗效果差的一大主要因素,成为肿瘤免疫治疗的一大障碍。因此,如何改变肿瘤免疫抑制的微环境是提高肿瘤免疫治疗效果的关键问题之一。肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-Associated Macrophages,TAM）在TME中占有很高比例,根据功能的不同,TAM主要分为M1型和M2型两种,而且TAM以M2型巨噬细胞为主。M2型巨噬细胞在肿瘤的生长、侵袭和转移过程中扮演着重要的角色,表现为促进肿瘤发展及抑制免疫的特点。而M1型巨噬细胞与M2型巨噬细胞功能相反,其抑制肿瘤的生长、侵袭和转移。因此将M2型极化为M1型则可以恢复巨噬细胞抗肿瘤的作用,并缓解TME的免疫抑制现象,增强免疫治疗的效果。外泌体是细胞正常生命活动过程中产生的一种胞外囊泡,其携带有亲本细胞的复杂RNA和蛋白质,具有亲本细胞的一些生理特性,如来源于M1型巨噬细胞的外泌体具有M1型巨噬细胞的生理功能,可呈现将巨噬细胞极化为M1表型的能力。基于此,我们设计了一种M1型巨噬细胞的外泌体疫苗(M1OVA-Exos)。首先,通过腹腔灌洗得到小鼠的原代巨噬细胞（M0）,然后利用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）将其极化为M1型巨噬细胞,并使其摄取抗原——鸡卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）,最后,通过超滤法得到外泌体疫苗M1OVA-Exos。实验结果表明,M1OVA-Exos到达肿瘤部位,一方面可以极化M2型巨噬细胞为M1型,发挥杀伤肿瘤细胞的作用,同时改善了肿瘤免疫抑制的微环境,增加了T细胞向肿瘤组织的浸润。另一方面,M1OVA-Exos作为肿瘤疫苗激活机体免疫反应,实现细胞免疫和体液免疫,有效抑制肿瘤的增长和转移。
尹起亮[4]（2021）在《IL-33修饰的黑色素瘤干细胞疫苗抗肿瘤及免疫机制研究》文中指出研究背景:随着对肿瘤免疫机制的深入研究,肿瘤免疫治疗成为继手术,化疗,放疗后的又一突破性治疗策略。黑色素瘤免疫治疗是近年来研究的热点,特别是针对细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（cytotoxic T-lymphocyte antigen-4,CTLA-4）和程序性死亡受体-1（programmed cell death protein-1,PD-1）的免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors,ICIs）,已取得了良好的临床疗效。疫苗作为免疫治疗领域的重要分支,在黑色素瘤中的研究甚少,gp100肽疫苗在体外可产生高水平的循环T细胞,并能识别和杀伤黑色素瘤细胞,但临床疗效仍不理想,因此,有效的肿瘤疫苗可作为黑色素瘤免疫治疗领域的重要补充。肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）的概念拓宽了我们对黑色素瘤的理解,根据CSCs理论,靶向黑色素瘤干细胞（melanoma stem cells,MSCs）治疗可抑制黑色素瘤的生长并降低肿瘤复发和转移的风险,因此,以MSCs为靶点的肿瘤疫苗将改善目前免疫治疗方案的疗效。然而,利用疫苗刺激机体产生抗肿瘤免疫反应仍然具有很大挑战,单纯的MSCs疫苗尚不足以诱导强烈的抗肿瘤免疫效应,目前在黑色素瘤中的MSCs疫苗研究大多是通过MSCs致敏DCs去诱导保护性抗肿瘤免疫作用,此外,免疫佐剂可增强MSCs疫苗抗肿瘤免疫应答,通过免疫佐剂IL-21基因修饰MSCs作为疫苗免疫小鼠可增强补体依赖的细胞毒活性和NK细胞毒活性。IL-33作为一种多效性免疫效应因子在激活抗肿瘤免疫中发挥重要作用,包括刺激DCs成熟,增强CD8+T细胞和NK细胞肿瘤杀伤作用,增强体内抗原特异性效应T细胞和记忆T细胞免疫反应等,能显着抑制小鼠肿瘤生长和肺转移,同样,IL-33可作为一种有效的免疫佐剂。而利用IL-33修饰的MSCs作为疫苗对黑色素瘤的影响目前尚无报道,其抗肿瘤免疫机制也有待进一步阐释。研究目的:本研究通过制备IL-33修饰的黑色素瘤干细胞疫苗,旨在研究其抑制黑色素瘤生长和转移的效果,并探索其抗肿瘤的免疫效应机制,为黑色素瘤干细胞疫苗在黑色素瘤免疫治疗中的应用奠定理论和实验基础。研究方法:1.黑色素瘤干细胞疫苗的制备（1）利用免疫磁珠技术分选细胞:利用免疫磁珠从B16F10细胞中分选出B16F10-CD44+CD133+细胞（即黑色素瘤干细胞）和B16F10-CD44-CD133-细胞。（2）分选后黑色素瘤干细胞的鉴定:通过流式细胞术测定分选前后细胞表面CD44,CD133和MHC I的表达;测定细胞克隆形成能力:将分选前后的B16F10和B16F10-CD44+CD133+细胞进行普通的二维（two dimension,2D）和三维（three dimension,3D）培养,观察细胞克隆形成能力;提取分选前后细胞的总RNA,进行RT-q PCR测定干性基因SOX-2,OCT-4和KLF-4的表达。（3）IL-33过表达基因腺病毒感染B16F10-CD44+CD133+:将状态良好的B16F10-CD44+CD133+接种到6孔盘,第2天加入适当体积的病毒（HBAD-EGFP过表达对照或HBAD-IL33-EGFP）,感染8 h。（4）肿瘤细胞灭活及灭活后鉴定:（1）利用丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）50μg/ml作用肿瘤细胞4 h对其进行灭活,利用MTT法测定不同时间点细胞增殖率;（2）肿瘤细胞经MMC作用后收集细胞上清液,进行酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定IL-33的表达。2.黑色素瘤干细胞疫苗诱导抗肿瘤效果评价（1）建立预防性动物模型:荷瘤小鼠模型:将不同实验组灭活后的肿瘤细胞（包括等体积PBS）5×105个/次接种于C57BL/6小鼠腹股沟皮下,共免疫3次,每次间隔7天,末次免疫7天后,所有小鼠于背部皮下注射B16F10细胞5×105个,定期测量肿瘤大小;肺转移模型:免疫方式同上,末次免疫7天后,所有小鼠经尾静脉注射5×105个B16F10细胞,观察并记录肺转移情况,记录生存期。（2）肿瘤病理组织学检测:末次免疫后3周,取不同组小鼠肿瘤组织进行病理组织学检测,包括苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色,CD8,Ki-67和Caspase-3的免疫组织化学染色。3.黑色素瘤干细胞疫苗诱导抗肿瘤免疫机制的研究（1）疫苗对DCs成熟能力的影响:将小鼠骨髓来源的DCs与不同实验组灭活后的肿瘤细胞（包括等体积PBS）利用悬挂式细胞培养小室间接共培养,共培养4天后,观察DCs形态变化并利用流式细胞术测定细胞表面成熟标志物CD11c,CD80,CD86和MHC II的表达;然后收集DCs并与CFSE标记的脾淋巴细胞以1:10的比例直接共培养6天,通过流式细胞术测定CD8+T细胞CFSE的表达,利用ELISA测定各组细胞培养上清液中IFN-γ和TNF-α的分泌。（2）疫苗对脾脏CD8+T细胞的影响:在末次免疫后3周,取不同组小鼠脾脏淋巴细胞,进行流式细胞术,通过测定脾淋巴细胞表面CD3,CD8和CD69的表达检测疫苗对脾脏CD8+T细胞比例及活性的影响;通过测定PD-1,CTLA-4和Tim-3及中心记忆性表型CD44,CD62L和CD127的表达检测疫苗对CD8+T细胞免疫检查点及CD8+中心记忆性T细胞的影响;通过测定细胞内IFN-γ和Gzm B的表达检测疫苗对CD8+T细胞抗肿瘤效应分子表达的影响。（3）疫苗对小鼠脾淋巴细胞杀伤能力的影响:在末次免疫后3周,取不同组小鼠脾脏淋巴细胞作为效应细胞,体外培养的B16F10细胞作为靶细胞;同样,取疫苗组小鼠脾脏淋巴细胞作为效应细胞,B16F10和分选后的B16F10-CD44+CD133+及B16F10-CD44-CD133-细胞作为靶细胞,利用Calcein-AM释放实验测定脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。（4）黑色素瘤组织细胞中CD44,CD133及MHC I的表达:末次免疫后3周,利用流式细胞术测定不同组小鼠黑色素瘤组织细胞中CD44,CD133及MHC I的表达。（5）检测小鼠血清细胞因子水平:在末次免疫后3周,取不同组小鼠血清,利用ELISA检测不同组小鼠血清IFN-α,IL-2,TNF-α和IFN-γ的水平。研究结果:利用免疫磁珠技术成功分选出B16F10-CD44+CD133+细胞,其纯度可达到96.14%,并且B16F10-CD44+CD133+细胞的克隆形成能力较强,其干性相关基因SOX-2,OCT-4和KLF-4的表达明显增强,细胞表面MHC I的表达下降。通过IL-33过表达基因腺病毒成功感染B16F10-CD44+CD133+细胞后,利用MMC对其灭活,并测定细胞活性和IL-33的分泌,同时将灭活后的细胞接种到小鼠腹股沟皮下发现未成瘤,最后得到细胞增殖活性受到抑制但仍可分泌IL-33的B16F10-IL-33 CD44+CD133+细胞株,即黑色素瘤干细胞疫苗（以下简称“疫苗”）。在预防性小鼠模型中,疫苗可明显抑制小鼠黑色素瘤生长及肺转移,并诱导黑色素瘤细胞凋亡,荷瘤小鼠模型中疫苗组小鼠中位生存期和总生存期均明显延长（分别为40天和55天）,而在肺转移模型中疫苗组小鼠中位生存期和总生存期的延长时间更加显着（分别为55天和70天）。进一步研究疫苗抗肿瘤的免疫效应机制,我们发现:（1）疫苗可促进小鼠骨髓来源的DCs成熟,诱导DCs成熟标志物表达上调,并且疫苗作用后的DCs可激活CD8+T细胞,包括刺激CD8+T细胞增殖和促进CD8+T细胞分泌IFN-γ和TNF-α;（2）疫苗免疫小鼠3周后,发现疫苗可增加小鼠脾脏CD8+T细胞比例及活性,并降低免疫检查点的表达,此外,疫苗可诱导脾脏CD8+中心记忆性T细胞的形成并增加CD8+T细胞抗肿瘤效应分子的表达;（3）疫苗免疫小鼠3周后可明显增强小鼠脾脏淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,并且这种杀伤作用特异性强,可靶向杀伤B16F10-CD44+CD133+细胞;（4）疫苗组荷瘤小鼠肿瘤细胞CD44和CD133的表达降低,而MHC I表达增加,并且黑色素瘤组织中CD8+T细胞浸润增加;（5）疫苗可增加免疫后小鼠血清抗肿瘤细胞因子IL-2,IFN-α,TNF-α和IFN-γ的分泌。研究结论:1.从B16F10黑色素瘤细胞成功分选出高纯度、具有干细胞性质的B16F10-CD44+CD133+细胞,并制备出增殖活性受到抑制但仍可分泌IL-33的B16F10-IL-33 CD44+CD133+全细胞疫苗。2.疫苗能明显抑制小鼠黑色素瘤生长和肺转移,诱导肿瘤细胞凋亡,并延长小鼠中位生存期和总生存期。3.疫苗诱导抗肿瘤免疫作用是通过刺激DCs成熟而启动并促进CD8+T细胞增殖,同时抑制CD8+T细胞在体内分化耗竭,诱导记忆性T细胞形成。4.疫苗通过激活宿主体内细胞免疫,增加黑色素瘤组织中CD8+T细胞的浸润,启动细胞毒性T淋巴细胞免疫反应,进而特异性靶向杀伤黑色素瘤干细胞。
吉国锋[5]（2021）在《生物可降解高分子免疫植入器件用于结直肠癌术后免疫治疗研究》文中进行了进一步梳理结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是消化道常见的恶性肿瘤之一,手术切除是治疗结直肠癌首选也是最有效的方案。但对于中晚期结直肠癌,由于癌肿浸润广泛,手术无法达到根治性切除,或者手术时已经发生远处转移,局部残留肿瘤细胞和远端转移灶肿瘤细胞在术后继续生长引起肿瘤复发和转移,是导致手术失败和患者死亡的主要原因。全身系统性化疗和放射治疗是预防中晚期结直肠癌术后局部复发和远处转移的重要治疗措施。然而考虑到患者术后体质较弱,需要一定时间的恢复期,加之切口愈合等因素,一般至少在术后2～3周方可进行全身化疗和放疗。在这一时期,往往错过了消灭残留肿瘤细胞的最佳时机,而且这个间隙也为肿瘤的复发创造了早期条件。因此,寻找更佳的术后治疗措施来解决进展期结直肠癌术后复发和转移仍是目前临床最亟待解决的术后难题。近年来,多种肿瘤免疫疗法被证实可以有效杀灭肿瘤并可预防肿瘤复发,但在实体瘤治疗方面,肿瘤免疫治疗面临诸多挑战,如免疫治疗响应性低,免疫药物耐药,非肿瘤靶向分布（on-target but off-tumor）,毒副作用大等。近年来有研究发现,通过在肿瘤内/附近局部缓释免疫药物能够较好的解决上述难题,而且安全性更高。对于结直肠癌,在肿瘤切除过程中,外科医生有独特的直接接触肿瘤机会,因此,原位（肿瘤切除部位）免疫治疗可能是一种很有前途的术后预防肿瘤复发和转移的策略。近年来基于生物高分子材料的肿瘤局部免疫治疗彰显了巨大治疗潜力,包括可植入支架、可注射水凝胶和原位形成的水凝胶等,这种局部免疫治疗可产生全身抗肿瘤免疫效果,甚至达到治愈的效果。这种易于装载、可降解和控制缓释特性,使基于生物可降解高分子免疫植入器件的局部免疫疗法成为肿瘤切除术后免疫治疗一种有前途的策略和途径。基于此,我们设计了一种由4臂氨基聚乙二醇（4-arm poly（ethylene glycol）amine,4臂PEG-NH2）和氧化葡聚糖（oxidized dextran,ODEX）交联得到的支架材料,并在材料制备过程中分别装载瑞喹莫德（Resiquimod,R848）和抗OX40抗体（CD134,anti-OX40 antibody,aOX40）,制备了生物可降解高分子免疫植入器件用于进展期结直肠癌术后免疫治疗。目的:借助于在结直肠癌手术中外科医生有独特的直接接触肿瘤机会,设计一种生物可降解高分子免疫植入器件用于进展期结直肠癌术后免疫治疗,以期解决结直肠癌术后复发和转移的难题。方法:（1）制备空白植入器件:用不同质量比的4臂PEG-NH2与ODEX交联,通过醛基与氨基的席夫碱反应（Schiff base reaction）形成交联网格的水凝胶,冻干后得到生物可降解高分子植入器件。并分别测试不同质量比制备的植入器件的强度和粘附性,根据测试结果选择最佳的质量比;（2）植入器件的表征:测试最佳质量比条件下制备的植入器件在体内和体外的降解情况;（3）制备免疫植入器件:将瑞喹莫德（R848）和抗OX40抗体（aOX40）担载到植入器件中,并测试其缓释效果;（4）验证免疫植入器件杀灭残留肿瘤效果:构建BALB/c小白鼠皮下不完全切除肿瘤模型,术中将免疫植入器件埋植到肿瘤切除后的残腔内,监测并记录残留肿瘤生长情况;并分析植入术后第3天和第10天残留肿瘤免疫微环境改变;（5）验证经免疫植入器件治疗后建立的肿瘤特异性免疫记忆效应:皮下不完全切除肿瘤模型中经免疫植入器件治愈的小鼠,再次进行肿瘤复种挑战实验,监测并记录复种肿瘤生长情况;并分析系统性免疫微环境（脾脏）的改变;（6）验证经免疫植入器件治疗后激活了全身系统性免疫反应（远端效应）:建立小鼠皮下双侧肿瘤模型,将免疫植入器件埋植入到其中一侧肿瘤腔内,然后监测并记录对侧肿瘤生长情况;并分析对侧肿瘤免疫微环境改变;结果:（1）当4臂PEG-NH2与ODEX的质量比为1:1时,交联形成的植入器件同时拥有较大的强度和较好的组织粘附性;在体外,植入器件降解时间大于9天;在体内,其降解时间大于21天;（2）R848和aOX40抗体被成功装载到植入器件中,并且能够随着植入器件的降解而同步缓慢释放,R848和aOX40抗体的释放时间均长于9天;（3）在皮下不完全切除肿瘤模型中,术中在肿瘤切除残腔中埋入免疫植入器件,可以根除残留肿瘤,而且治疗组所有小鼠在150天的观察期内均无肿瘤复发。残留肿瘤免疫微环境分析结果显示:在术后第3天,固有免疫被迅速激活,自然杀伤细胞（Nature killer cells,NK细胞）的浸润增多,树突状细胞（Dendritic cells,DCs）的活化增强,随后适应性免疫被激活,肿瘤内T细胞浸润数量显着增加（第10天）;（4）在小鼠对侧皮下复种肿瘤挑战模型中,结果显示经免疫植入器件治愈的小鼠能抵抗该挑战,再次在对侧皮下种瘤后,所有小鼠均未成瘤;全身系统性免疫分析结果显示:脾脏内记忆T细胞数量显着增多;（5）在构建的小鼠皮下双侧肿瘤模型中,将免疫植入器件植入到其中一侧肿瘤腔后,对侧肿瘤的生长得到了显着的抑制;对侧肿瘤免疫分析结果显示:对侧肿瘤内浸润T细胞数目也显着增多。结论:（1）我们设计了一种简单并易于操作的结直肠癌术后免疫治疗策略和方法,即将合成的治疗性的生物可降解高分子免疫植入器件植入到肿瘤切除腔内,通过协同激活固有免疫、适应性免疫和免疫记忆效应,有效清除术后残余肿瘤细胞和远端转移灶,并且能够防止术后肿瘤复发;（2）我们设计的生物高分子免疫植入器件被证实是术后结直肠癌免疫治疗的合理选择,这种术后免疫治疗管理更具有特异性、更有效、毒性更小,有着巨大临床转化潜能。
鹿瑶[6]（2021）在《免疫检查点抑制剂对乳腺癌的治疗效果观察》文中提出乳腺癌是女性最常见的肿瘤,长期以来一直是女性肿瘤患病率的第一位,是威胁女性生命和健康的关键原因之一。在过去的30年中,新的抗癌药物如雨后春笋般涌现,诊断和治疗的发展使乳腺癌的死亡率降低了39%。但是,与乳腺癌的斗争仍然面临许多问题和挑战,迫切需要找到新的合理的治疗方法。随着免疫学和生物学的不断发展,免疫疗法长期以来已成为继传统化学疗法,放射疗法和外科手术之后的另一种重要的乳腺癌治疗方法。在肿瘤微环境中,抗原刺激T淋巴细胞活化过程中,由于多种免疫检查点的存在,导致T细胞无法有效激活,免疫检查点在肿瘤的发生和发展过程中起着关键作用。免疫检查点抑制通路的确定导致免疫疗法的重大改进。目前多数治疗主要针对淋巴细胞激活基因-3（LAG-3）、细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和程序性死亡受体-1（PD-1/PD-L1）等相关免疫检查点分子为靶点。但不同免疫检查点抑制剂对不同类型的乳腺癌的敏感性是否存在差别尚不确定,因此明确不同类型乳腺癌在应用免疫检查点抑制剂的治疗效果,对如何更合理的临床选择将具有重要意义。为了阐明这一问题,本课题作为实验性的研究,主要内容如下:1.观察三种免疫检查点抑制剂对转移性乳腺癌的治疗效果为了了解不同免疫检查点抑制剂在治疗乳腺癌患者中的治疗效果,分别统计了使用三种免疫检查点抑制剂的治疗组与其对照组（常规化疗组）患者治疗效果,结果显示对照组客观缓解率20%。PD-1/PD-L1研究组客观缓解率55%,显着高于对照组（P<0.05）。CTLA-4研究组客观缓解率50%,显着高于对照组（P<0.05）。LAG-3研究组客观缓解率40%,显着高于对照组（P<0.05）。与对照组相比,三种免疫检查点抑制剂均较对照组治疗有效率升高,差异均有显着统计学意义（P<0.05）,说明此三种免疫检查点抑制剂均可提高对乳腺癌的治疗疗效,但三种免疫检查点抑制剂之间无明显差别。2.免疫检查点抑制剂相比于传统治疗对乳腺癌患者一般状态的影响为了了解三种免疫检查点抑制剂在治疗乳腺癌患者时,是否也对患者的一般状态有影响,如体重、心率、血压,我们观察了免疫检查点抑制剂治疗乳腺癌患者后患者的一般状态,结果显示免疫检查点抑制剂组体重、心率及血压与对照组不存在明显差别,没有统计学意义（P>0.05）。说明免疫检查点抑制剂对乳腺癌患者一般状态没有明显影响。3.免疫检查点抑制剂与传统治疗前后血清免疫球蛋白水平比较为了观察与传统治疗方法相比,免疫检查点抑制剂是否能够改善B细胞功能,我们将三种免疫检查点抑制剂组和对照组分别进行观察。结果显示与对照组相比,研究组在治疗后Ig G水平较对照组升高（P<0.05）,其余几种类型抗体包括Ig A、Ig M和Ig E则无明显差别。提示免疫检查点抑制剂有促进乳腺癌患者B细胞分泌产生Ig G抗体的功能,增强体液免疫应答能力,从而参与免疫应答或提高自身抗感染能力,具有良好的治疗作用。4.三种免疫检查点抑制剂对三阴性乳腺癌（TNBC）与非三阴性乳腺癌（非TNBC）患者肿瘤大小的抑制作用为了进一步了解三种免疫检查点抑制剂在治疗不同类型乳腺癌患者时的治疗效果,我们观察了三种免疫检查点抑制剂治疗后,TNBC与非TNBC患者肿瘤大小的变化,结果显示PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂对TNBC患者相比与非TNBC患者的肿瘤大小明显变小（以肿瘤的较大直径与较大的垂直直径的乘积减少50%以上为判断标准）,差异有统计学意义（P<0.05）。然而,CTLA-4和LAG-3免疫检查点抑制剂对TNBC和非TNBC患者都无明显差异,肿瘤无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）。5.三种免疫检查点抑制剂对TNBC与非TNBC复发的影响为了解三种免疫检查点抑制剂治疗不同类型乳腺癌后,是否具有显着的抑制癌症复发的作用,我们随访了治疗后出院患者的乳腺癌复发情况,结果显示PD-1/PD-L1和CTLA-4免疫检查点抑制剂应用于TNBC患者可提高病理学缓解率（PCR率）,但对于Luminal A型、Luminal B型乳腺癌基本无获益,而LAG-3免疫检查点抑制剂对TNBC与非TNBC患者的PCR率无明显提高。6.三种免疫检查点抑制剂治疗乳腺癌患者的药物不良反应情况为了明确三种免疫检查点抑制剂在治疗乳腺癌患者时,是否可引起药物不良反应的发生,观察了患者治疗后出现的药物不良反应情况,包括分级、死亡、停药、剂量调整和免疫相关不良事件和输液反应情况,结果显示三种免疫检查点抑制剂的不良反应在各型乳腺癌中与单纯化疗不良反应发生率相似,但其远期影响还疗效需进一步随访观察。结论:1.免疫检查点抑制剂治疗乳腺癌较传统化疗效果显着。2.免疫检查点抑制剂可提高乳腺癌患者血清Ig G水平。3.不同免疫检查点抑制剂对TNBC和非TNBC患者治疗效果不同。免疫检查点抑制剂治疗转移性乳腺癌安全有效,是一种具有发展潜力的临床治疗新策略,值得研究推广。
司怡然[7]（2021）在《超声介导的物理损伤技术激活机体免疫在肿瘤治疗中的应用及机制研究》文中研究说明背景:随着对免疫学及肿瘤发病机制的逐步深入探讨,肿瘤免疫治疗已转变成为当前重要的研究手段之一。肿瘤疫苗属于免疫治疗的范畴,近年来在临床前研究和临床研究领域均获得诸多优秀的成果。本研究采用肿瘤细胞裂解物（Tumor cell lysates,TCL）联和佐剂建立肿瘤疫苗,拟探讨其在黑色素瘤中发挥出的潜在免疫激活及抑制肿瘤的作用,并为后续研究做好理论铺垫。材料与方法:我们采用超声破碎仪制备B16F10黑色素瘤TCL,并使用台盼蓝染色明确其活性。24只C57BL/6小鼠随机分为四组,分别予PBS、IL-2、TCL及TCL+IL-2皮下注射,每周1次,共3周,第4周对侧植瘤,观察小鼠的出瘤时间及肿瘤大小。并连续采集小鼠外周血行CD4+T及CD8+T细胞的流式动态分析,并采用流式及免疫组化的方法检测脾脏及肿瘤组织中CD4+T及CD8+T细胞的表达。结果:TCL+IL-2组小鼠经预防性免疫后,出瘤时间明显延迟（p=0.034）,肿瘤体积（p=0.023）及瘤重（p=0.0015）也显着小于对照组。流式检测结果提示TCL+IL-2组及单用TCL组小鼠,外周血CD8+T细胞较对照组上升（p=0.0016,p=0.012）。TCL+IL-2组的CD4+T细胞在植瘤后较对照组有所下降（p=0.0089）。脾脏及肿瘤组织中CD4+T及CD8+T细胞与外周血中的表达趋势相同。结论:TCL佐以IL-2可以有效激活机体免疫,预防小鼠黑色素瘤发生并遏抑肿瘤的生长。背景:近年来,新材料技术和医学影像学迅猛发展,新型物理治疗方式成为肿瘤治疗的又一重要策略。超声微气泡物理治疗技术是一种无创的物理治疗手段。相变纳米粒在外界超声干预下,发生液气相变从而导致细胞原位损伤。本研究拟探讨超声联合相变纳米粒的物理治疗方式在乳腺癌中的作用及激活免疫的相关机制研究。材料与方法:制备氟碳脂质纳米粒（Lipid Fluorocarbon Nanoparticles,LIP-PFH纳米粒）,使用马尔文粒径及电位检测设备测试其理化特性,并使用共聚焦拍摄手段明确4T1乳腺癌细胞对其吞噬作用。通过CCK-8实验,凋亡及周期实验分析低强度聚焦超声（Low-intensity focused ultrasound,LIFU）联合纳米粒的物理治疗技术在体外的抑瘤作用。建立Balb/c乳腺癌小鼠移植瘤模型,进一步证实该种物理治疗的体内抑瘤作用,并通过肺转移灶的H&E染色,初步提示对远处转移的作用。流式细胞术监测小鼠外周血、脾脏及肿瘤组织中CD4+T,CD8+T细胞的改变,明确治疗后对机体免疫的影响。进行免疫原性细胞死亡标记物的检测,及DC细胞成熟度的流式分析,以研究潜在的免疫机制,并用缺乏免疫功能的裸鼠实验再次证实。结果:LIFU联合LIP-PFH纳米粒的物理治疗手段,在体外和体内实验中均看到有效抑制4T1细胞的增殖,并促进其凋亡,并且在体内动物实验中初步看到对远处肺转移也具有抑制作用。外周血,脾脏和肿瘤组织中CD4+T和CD8+T细胞亚群比例在该种物理治疗后显着增加,表明该种治疗技术有效增强了乳腺癌细胞中的抗肿瘤免疫应答。免疫原性细胞死亡标记物（ATP,高迁移率族蛋白B和钙网蛋白）以及DC细胞成熟度的流式分析表明,超声联合纳米粒的物理治疗技术可通过诱导4T1乳腺癌细胞发生免疫原性细胞死亡,介导DC成熟明显增加,以进一步促进细胞毒性T细胞比例的增多,增加肿瘤组织中T淋巴细胞的浸润。裸鼠实验进一步验证了该种作用机制。结论:超声联合相变纳米粒的物理治疗可以有效增强乳腺癌细胞的抗肿瘤免疫反应,改善其免疫原性,为未来提高乳腺癌免疫治疗疗效提供潜在的研究方向。
邢续扬,王孝春,何伟[8]（2021）在《肿瘤免疫治疗及其药物研发进展》文中进行了进一步梳理分子生物学和肿瘤生物学的进步极大地改变了肿瘤治疗模式,大量科学研究揭示了肿瘤免疫逃逸的机制,各种新型肿瘤免疫治疗应运而生,成为继手术、放疗、化疗、靶向治疗后肿瘤的另一有效治疗手段。本文介绍了肿瘤细胞免疫逃逸的机制,并重点介绍了细胞因子免疫疗法、治疗性单克隆抗体免疫疗法、PD-1/PD-L1疗法、CAR-T疗法、肿瘤疫苗、溶瘤病毒等新型免疫疗法的设计原理、上市生物药物及最新研究进展,同时对比了各免疫疗法的优缺点,为肿瘤免疫治疗中的药物研发提供思路与方法。
贺庆,高华,王军志[9]（2020）在《个体化治疗性肿瘤疫苗的临床前药效学研究进展》文中研究表明治疗性肿瘤疫苗是肿瘤免疫治疗产品开发的热点,至今通过临床评价正式上市的产品仍寥寥无几。患者肿瘤异质性和人白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）异质性是阻碍治疗性肿瘤疫苗发展的主要因素。针对该问题,开发个体化治疗性肿瘤疫苗是此类疫苗发展的前沿领域和未来方向,如何科学评价其临床前药效作用也是开发此类产品面临的挑战。本文通过分析总结肿瘤抗原和肿瘤疫苗的分类及特点、个体化治疗性肿瘤疫苗的作用机制及影响因素、个体化治疗性肿瘤疫苗的临床前药效学研究进展,以期为进行相关药效学研究提供参考。
李田宽[10]（2020）在《协同功能微泡构建及其在非小细胞肺癌治疗中的应用》文中进行了进一步梳理研究背景:在世界范围内,肺癌的发病率和死亡率均是排在第一位,肺癌的主要类型是非小细胞肺癌（NSCLC）。以PD1/PD-L1等免疫检查点抑制剂（ICIs）目前已成为肺癌治疗领域最热门的抗肿瘤药物,ICIs通过降低肿瘤细胞免疫逃逸能力而治疗肿瘤。大量的临床试验结果显示免疫疗法已经成为与化疗、放疗等同样有效的治疗晚期非小细胞肺癌的手段,ICIs已被NCCN指南推荐为晚期肺癌的一线治疗方法。临床证据表明,化疗药物联合PD1/PD-L1检查点抑制剂的治疗效果优于单一药物治疗。然而,除了PD1/PD-L1检查点抑制剂的心脏毒性外,联合用药还会加重血液学毒性、肝毒性和神经毒性。因此,需要适当的给药系统来减少这两种药物的不良影响。本课题中,我们首先合成了在DTX的磷脂微泡,并在微泡表面连接anti PD-L1抗体,主动和被动靶向作用下,化疗药物在肿瘤细胞内内大量富集,促进肿瘤细胞凋亡并抑制跨越肿瘤细胞周期;在皮下瘤模型的基础上,我们建立了小鼠肺内肿瘤模型,验证了在低频超声的作用下,新型多功能微泡对小鼠肺部原位肿瘤的治疗效果。我们构建了肺癌不完全消融皮下瘤模型,将微泡用于微波不完全消融后的残余病灶的治疗,验证了此协同功能超声微泡对于微波不完全消融后残余病灶的控制效果和作用机制。第一部分协同功能微泡构建及其对肺癌细胞的作用目的:构建负载多西他赛（DTX）和anti-PD-L1 mAb的协同功能磷脂微泡（PDMs）并研究该微泡对肺癌细胞的杀伤作用。方法:通过薄膜水化法制备了负载多西他赛和anti-PD-L1 mAb的磷协同功能磷脂微泡。通过电镜和激光共聚焦显微镜对微泡的形态进行观察,通过马尔文激光粒度分析仪检测粒径和Zeta电位,通过高效液相色谱方法检测微泡中的多西他赛包封率及载药率。我们同时检测了多西他赛的释放曲线,并对微泡的在体外和体内的成像能力进行了检测。通过微泡溶血实验和小鼠生化指标评估了微泡的生物安全性。通过激光共聚焦显微镜观察并流式细胞仪检测了,负载anti-PD-L1 mAb微泡对肺癌细胞的摄取药物的影响。通过流式细胞术检测了鼠源的LLC细胞、人源的NCI-H460、NCI-1299和A549细胞表面的PD-L1的表达情况,通过CCK-8方法检测了微泡对几种细胞肺癌细胞的杀伤作用与PD-L1表达的关系。通过流式细胞术检测了微泡促进LLC肿瘤细胞凋亡的能力和细胞周期抑制能力。结果:负载多西他赛和anti-PD-L1 mAb的协同功能磷脂微泡具有较好的形态,粒径666.4±35.9 nm,包封率为57.34±2.61%,载药率为4.45±0.91%。超声作用下,微泡内的多西他赛释放速度明显提高,在微泡外连接anti-PD-L1 mAb对多西他赛的药物释放没有影响。激光共聚焦显微镜下显示荧光标记抗体的结合在微泡表面。超声成像下微泡有较好的增强效果,增强效果不受搭载药物和抗体的影响。体外实验证明微泡不会产生溶血效应,微泡对小鼠的生化指标无明显影响,对重要器官无明显损害。激光共聚焦显微镜和流式细胞术显示载有anti-PD-L1抗体的微泡能促进肺癌细胞对药物的吸收,低频超声击破微泡可以进一步增加肺癌细胞对药物的吸收。CCK-8实验显示负载了anti-PD-L1 mAb的微泡对肿瘤细胞增殖的抑制能力与肿瘤细胞表面PD-L1表达呈正相关,而低频超声辐照则增强了对肿瘤细胞的抑制作用。流式检测了微泡对肿瘤细胞凋亡的影响,结果显示超声辐照联合anti-PD-L1 mAb使肺癌细胞总凋亡比例最高,同时,anti-PD-L1 mAb的靶向作用和低频超声辐照可以增强多西他赛对肿瘤细胞周期的抑制作用。结论:通过薄膜水化法合成的负载多西他赛和anti-PD-L1 mAb的协同功能磷脂微泡具有较好的成像能力,在低频超声作用下可以迅速释放药物,具有较好的生物安全性。该微泡可以促进肺癌细胞对药物的吸收,负载多西他赛和anti-PD-L1 mAb的磷脂微泡对肿瘤细胞增殖有更强的抑制作用,在低频超声作用下能促进肺癌细胞的凋亡并能更好的抑制细胞周期。第二部分协同功能微泡（PDMs）对肺癌模型的治疗效果评价目的:建立小鼠肺癌皮下瘤模型及原位瘤模型,评估协同功能微泡对两种肺癌模型的治疗治疗效果。方法:建立小鼠肺癌皮下瘤模型,在微泡上搭载亲脂荧光探针DiR,分别标记多西他赛微泡（DMs）,载多西他赛和anti-PD-L1 mAb的协同功能微泡（PDMs）,对比不同方法下（游离的DiR、DiR-DMs或DiR-PDMs经尾静脉注射,DiR-PDMs联合低频超声）在肿瘤部位的富集情况,评估了协同功能磷脂微泡超声击破后在药物肿瘤部位的富集能力,并通过活体成像对富集DiR的重要器官的进行成像观察组织分布。采用对照组（注射PBS）、Free DTX（注射游离DTX溶液）、Free combo（注射游离DTX和anti-PD-L1 mAb）、DMs、PDMs,协同治疗组（PDMs+US）不同治疗方法对小鼠皮下瘤模型进行治疗,观察了小鼠的体重、肿瘤大小、生存期差异,对肿瘤标本进行TUNEL和免疫组化染色（CD31、Ki67）、检测了肿瘤样本中CD4+、CD8+T淋巴细胞的改变,通过western blot方法对肿瘤组织中Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 8、Cleaved-caspase 9,通过ELISA方法对TNF-α,TGF-βand VEGF进行了检测。在DSA引导下经过肺穿刺建立了小鼠肺肺内肿瘤模型,采用上述不同方案进行治疗,通过CT进行随访,观察肿瘤体积、小鼠体重、生存期的变化。结果:与游离DiR和DiR-DMs相比,DiR-PDMs在体内和体外的肿瘤组织中均表现出增强的信号,而在低频超声下这种信号强度进一步增强。DiR-PDMs联合低频超声在第1小时即可是肿瘤内达到最大药物浓度,单纯DiR-PDMs注射药物浓度在第6小时达到最大值,游离DiR和DiR-DMs在肿瘤内的富集程度始终较低。在皮下瘤模型中,PDMs联合US照射组的存活率最高,且对肿瘤生长抑制效果最好,单独使用PDMs的治疗效果优于自由药物组合,排在第二位。协同治疗比化疗有更明显的疗效,DMs对肿瘤体积抑制和生存率的治疗效果略有改善,组间体重差异不明显。在肿瘤组织免疫组化染色中,联合治疗组中TUNEL凋亡率最高,CD31、Ki67最低。PDMs联合US照射组肿瘤样本中浸润的CD4+、CD8+T细胞比例和数量最多,凋亡通道蛋白cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 8、cleaved-caspase 9表达也最高。同时,PDMs联合US照射组有最高的TNF-α和最低的TGF-β、VEGF。通过CT评估,结果显示联合治疗组有最低的肿瘤生长速度,最长的生存期和最好的生存状态。结论:皮下瘤模型显示,协同功能磷脂微泡联合超声可以促进药物更快地在肿瘤富集并获得最高的药物浓度,产生最好的治疗效果。该治疗方案在,肺内肿瘤模型中也能起到同样的治疗效果。第三部分协同功能微泡（PDBMs）对肺癌不完全消融模型的治疗效果评价目的:建立小鼠肺癌不完全消融模型,评估协同功能微泡对肺癌不完全消融模型的治疗效果。方法:通过薄膜水化法制备了负载多西他赛、Bindarit和anti-PD-L1 mAb的磷协同功能磷脂微泡（PDBMs）。通过电镜、紫外光谱仪检测了微泡的形态、光谱等指标,采用高效液相色谱方法测试了微泡中的多西他赛、Bindarit的包封率和载药率。通过动物生化指标和重要脏器的HE染色切片评估了微泡的生物安全性。采用45°C 15min为不完全微波消融组（iMWA）,65°C 15min为完全消融组,通过流式细胞术检测了微波消融+PDBMs对肺癌细胞凋亡的影响。通过激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测了微波消融+PDBMs对肺癌表达单核细胞趋化蛋白-1（CCL2、MCP-1）、钙网蛋白（CRT）、PD-L1的影响。将微波消融+PDBMs治疗后的肺癌细胞与DC细胞在Transwell小室内孵育,通过流式细胞术检测微波消融+PDBMs治疗后的肺癌细胞对小鼠骨髓来源DC细胞（BMDCs）活化的影响。将微波消融+PDBMs治疗后的肺癌细胞、BMDCs、T淋巴细胞共同孵育,通过流式细胞术检测Ki67和Granzyme B评价T淋巴细胞的增殖能力和杀伤能力。通过标本、活体肿瘤探索了构建不完全消融的微波参数。构建小鼠肺癌不完全消融模型并随机分为五组:对照组（Control）,不完全消融组（iMWA）,iMWA+DTX组,iMWA+Bindarit组,iMWA+PDBMs,随访肿瘤体积、计算生存时间并检测肺转移灶的数量。将组织标本通过TUNEL染色评价治疗不同方法对肿瘤凋亡的影响,通过Ki67染色评价肿瘤组织内的增殖能力。通过流式细胞术评价肿瘤组织内CD4+和CD8+T细胞比例,以及Treg细胞的比例。检测肿瘤组织内TGF-β、VEGF、IL-10细胞因子的水平。结果:我们成功合成了负载多西他赛、Bindarit和anti-PD-L1 mAb的磷协同功能微泡。电镜下微泡呈现规则的圆形,紫外光谱显示PDBMs的波形,HPLC检测结果显示PDBMs中DTX的包封率为35.56±5.86%,载药率为4.25±0.67%,Bindarit的包封率为37.85±6.75%,载药率为4.67±0.53%。经尾静脉注射PDBMs每七天一次,总共五次,生化指标随访均在正常范围内,心、肝、脾、肺、肾HE染色未见异常。完全消融组（c MWA）促进肺癌细胞凋亡的作用最强,iMWA、iMWA+DTX组、iMWA+Bindarit组和iMWA+PDBMs引起肺癌细胞总凋亡比例在40%50%之间。将干预后的各组通过共聚焦显微镜和流式细胞术检测CCL2表达,结果显示,c MWA组最弱,iMWA组较对照组CCL2表达上升,iMWA+DTX组与对照组无明显统计学差异,在Bindarit的作用下iMWA+Bindarit组和iMWA+PDBMs的CCL2表达下降。通过共聚焦和流式细胞术对治疗后肺癌细胞检测发现不完全消融后肺癌CRT表达上升,DTX、Bindarit和anti-PD-L1 mAb对CRT表达无明显影响,不完全消融、DTX、Bindarit对肺癌细胞表达PD-L1无明显影响。在对DC活化检测方面,iMWA+PDBMs组DC激活比例增加,同时DC的IL-12p70分泌也相应增加;在T淋巴细胞活化方面,iMWA+PDBMs相较其他组可以增强CD8+T细胞的增殖能力和Granzyme B的表达量。我们建立了不完全消融模型,五组治疗方案中,iMWA+PDBMs可以明显降低消融后肿瘤生长速度,延长生存期,减少转移结节数目。消融后肿瘤组织TUNEL染色和Ki67免疫组化结果显示,iMWA+PDBMs组肿瘤内比例最高,增殖能力最弱。对肿瘤组织进行流式细胞术检测结果显示,iMWA+PDBMs组CD4+和CD8+T细胞比例上升,其中CD8+T细胞上升更明显,Treg比例下降。对肿瘤内细胞因子检测显示,微波消融后TGF-β、VEGF上升,协同微泡治疗后肿瘤内TGF-β、VEGF、IL-10下降。结论:协同功能微泡PDBMs具有很好的生物安全性,协同功能微泡可以抑制肺癌细胞CCL2的表达,提高DC细胞和T淋巴细胞的活化比例,降低肺癌不完全消融灶的生长速率和肺转移灶数量并延长小鼠的生存期。协同功能微泡PDBMs对肺癌消融后的治疗具有很高的潜在应用价值。
二、肿瘤疫苗和肿瘤的免疫治疗（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肿瘤疫苗和肿瘤的免疫治疗（论文提纲范文）
（1）个性化新抗原肿瘤疫苗：道阻且长，未来可期（论文提纲范文）
| 1 新抗原的鉴定 |
| 1.1 鉴定方法 |
| 1.2 验证方法 |
| 2 新抗原肿瘤疫苗 |
| 2.1 疫苗类型 |
| 2.2 疫苗设计与免疫方案 |
| 3 新抗原疫苗的临床应用现况 |
| 4 肿瘤新抗原疫苗面临的挑战 |
| 4.1 异质性 |
| 4.1.1 肿瘤异质性 |
| 4.1.2 患者HLA异质性 |
| 4.2 肿瘤微环境 |
| 4.3 新抗原的预测和验证 |
| 4.4 生产周期与成本 |
| 4.5 疗效评价体系 |
| 5 未来发展趋势与研究策略 |
| 5.1 寻找通用型新抗原 |
| 5.2 提高预测准确性 |
| 5.3 优化疫苗设计 |
| 5.4 探索联合治疗方案 |
（2）基于专利分析的肿瘤疫苗领域技术创新态势研究（论文提纲范文）
| 1 数据来源与方法 |
| 2 发明专利的申请及授权 |
| 3 区域分布 |
| 3.1 技术发源地 |
| 3.2 目标市场 |
| 4 技术创新实体 |
| 4.1 全球主要技术创新实体 |
| 4.2 中国主要技术创新实体 |
| 5 技术创新主题 |
| 6 结语 |
（3）M1型巨噬细胞外泌体疫苗通过调节肿瘤微环境增强肿瘤免疫治疗作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肿瘤免疫治疗概述 |
| 1.1.1 肿瘤免疫治疗的现状 |
| 1.1.2 肿瘤免疫治疗的方法 |
| 1.1.3 肿瘤免疫治疗的局限性 |
| 1.2 肿瘤微环境对免疫治疗的限制 |
| 1.2.1 肿瘤微环境的构成及危害 |
| 1.2.2 免疫抑制性细胞与物质 |
| 1.2.3 抗肿瘤免疫细胞和细胞因子 |
| 1.3 巨噬细胞的极化与意义 |
| 1.3.1 巨噬细胞的分型 |
| 1.3.2 巨噬细胞极化增强免疫治疗效果 |
| 1.3.3 巨噬细胞极化的方式 |
| 1.3.4 巨噬细胞极化的机制 |
| 1.4 外泌体概述 |
| 1.4.1 外泌体的生物发生 |
| 1.4.2 外泌体的提取方法 |
| 1.4.3 外泌体的来源及功能 |
| 1.4.4 外泌体作为肿瘤疫苗载体的研究现状 |
| 1.5 立题依据 |
| 第二章 M1_(OVA)-Exos的构建和表征 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 原代巨噬细胞的培养及鉴定 |
| 2.2.2 LPS极化原代巨噬细胞 |
| 2.2.3 巨噬细胞摄取OVA抗原 |
| 2.2.4 M1_(OVA)-Exos的提取与表征 |
| 2.2.5 统计与分析 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 原代巨噬细胞的鉴别 |
| 2.3.2 LPS极化巨噬细胞为M1 表型的表征 |
| 2.3.3 巨噬细胞摄取OVA的鉴别 |
| 2.3.4 外泌体的表征 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 M1_(OVA)-Exos的体外抗肿瘤作用及机制 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 M1_(OVA)-Exos与巨噬细胞的结合能力 |
| 3.2.2 M1_(OVA)-Exos对巨噬细胞表型的影响 |
| 3.2.3 M1-Exos极化巨噬细胞的机制研究 |
| 3.2.4 M1_(OVA)-Exos对巨噬细胞抗原呈递能力的影响 |
| 3.2.5 M1_(OVA)-Exos激活T细胞的能力 |
| 3.2.6 统计与分析 |
| 3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 巨噬细胞及B16-OVA对 M1_(OVA)-Exos的摄取能力 |
| 3.3.2 M1_(OVA)-Exos极化巨噬细胞为M1 表型 |
| 3.3.3 M1-Exos极化巨噬细胞的机制 |
| 3.3.4 M1_(OVA)-Exos增强巨噬细胞的抗原呈递能力 |
| 3.3.5 M1_(OVA)-Exos激活T 细胞为CD4~+T 细胞和CD8~+T 细胞 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 M1_(OVA)-Exos的体内抗肿瘤作用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 B16-OVA黑色素瘤荷瘤小鼠模型建立 |
| 4.2.2 实验分组与给药 |
| 4.2.3 M1_(OVA)-Exos对荷瘤小鼠的抑瘤作用 |
| 4.2.4 荷瘤小鼠肿瘤组织局部巨噬细胞表型分析 |
| 4.2.5 荷瘤小鼠肿瘤组织局部T细胞、NK细胞浸润 |
| 4.2.6 荷瘤小鼠血清中OVA抗体检测 |
| 4.2.7 荷瘤小鼠的主要脏器组织病理分析 |
| 4.2.8 B16-OVA黑色素瘤转移模型建立 |
| 4.2.9 M1_(OVA)-Exos抑制肿瘤转移效果 |
| 4.2.10 统计与分析 |
| 4.3 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 M1_(OVA)-Exos抑瘤作用 |
| 4.3.2 肿瘤组织局部巨噬细胞表型分析 |
| 4.3.3 肿瘤组织局部T细胞、NK细胞浸润 |
| 4.3.4 ELISA检测小鼠血清中的抗体 |
| 4.3.5 主要脏器病理分析 |
| 4.3.6 M1_(OVA)-Exos抑制肿瘤转移的效果 |
| 4.3.7 免疫组化分析转移小鼠肺组织T细胞浸润 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 |
（4）IL-33修饰的黑色素瘤干细胞疫苗抗肿瘤及免疫机制研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 黑色素瘤 |
| 1.1.1 流行病学 |
| 1.1.2 治疗现状 |
| 1.1.3 免疫治疗 |
| 1.2 肿瘤干细胞 |
| 1.2.1 肿瘤干细胞一般特征 |
| 1.2.2 黑色素瘤中的肿瘤干细胞研究 |
| 1.2.3 肿瘤干细胞——肿瘤免疫治疗的新靶点 |
| 1.2.4 肿瘤干细胞疫苗——靶向肿瘤干细胞免疫治疗 |
| 1.2.5 靶向肿瘤干细胞多种免疫治疗潜在机制 |
| 1.2.6 肿瘤干细胞疫苗潜在的抗肿瘤免疫机制 |
| 1.2.6.1 树突状细胞的作用 |
| 1.2.6.2 抗肿瘤特异性T细胞的作用 |
| 1.3 IL-33 |
| 1.3.1 IL-33 的免疫调节作用 |
| 1.3.2 IL-33 在肿瘤免疫中的作用 |
| 1.3.2.1 IL-33 对DCs的作用 |
| 1.3.2.2 IL-33 对CD8~+T细胞的作用 |
| 1.3.2.3 IL-33 在肿瘤疫苗中的潜在作用 |
| 1.3.3 IL-33 在黑色素瘤中的研究 |
| 第2章 研究方案 |
| 2.1 黑色素瘤干细胞疫苗的制备 |
| 2.2 黑色素瘤干细胞疫苗诱导抗肿瘤效果评价 |
| 2.3 黑色素瘤干细胞疫苗诱导抗肿瘤免疫机制的研究 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要试剂的配制 |
| 3.1.3 主要实验仪器 |
| 3.1.4 实验动物 |
| 3.1.5 实验相关细胞株 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 细胞复苏、培养及冻存 |
| 3.2.2 利用免疫磁珠技术分选细胞 |
| 3.2.3 测定细胞克隆形成能力 |
| 3.2.4 总RNA的提取与逆转录 |
| 3.2.5 实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, RT-q PCR)检测细胞的干性 |
| 3.2.6 流式细胞术测定细胞表面MHC I的表达 |
| 3.2.7 IL-33 过表达基因腺病毒感染B16F10-CD44~+CD133~+ |
| 3.2.8 肿瘤细胞灭活及细胞灭活后鉴定 |
| 3.2.9 酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)测定IL-33 的表达 |
| 3.2.10 建立预防性动物模型 |
| 3.2.11 肿瘤病理组织学检测 |
| 3.2.12 DCs的诱导及鉴定 |
| 3.2.13 检测疫苗促DCs成熟能力 |
| 3.2.14 小鼠脾脏淋巴细胞的分离及脾脏中CD8~+T细胞比例及活性测定 |
| 3.2.15 小鼠脾脏淋巴细胞CFSE染色 |
| 3.2.16 检测疫苗对DCs激活CD8~+T细胞能力的影响 |
| 3.2.17 测定疫苗对CD8~+T细胞免疫检查点及CD8~+记忆性T细胞的影响 |
| 3.2.18 检测疫苗对CD8~+T细胞抗肿瘤效应分子的影响 |
| 3.2.19 测定小鼠脾淋巴细胞的杀伤能力 |
| 3.2.20 测定黑色素瘤组织细胞中CD44,CD133的表达 |
| 3.2.21 检测小鼠血清细胞因子水平 |
| 3.2.22 统计学分析 |
| 第4章 实验结果 |
| 4.1 黑色素瘤干细胞疫苗的制备 |
| 4.1.1 B16F10-CD44~+CD133~+黑色素瘤干细胞的鉴定 |
| 4.1.2 IL-33 过表达基因腺病毒感染B16F10-CD44~+CD133~+细胞 |
| 4.1.3 黑色素瘤干细胞的灭活 |
| 4.1.4 B16F10-IL-33 CD44~+CD133~+细胞灭活后鉴定及抗肿瘤疫苗制备 |
| 4.2 黑色素瘤干细胞疫苗诱导抗肿瘤效果评价 |
| 4.2.1 疫苗对荷瘤小鼠肿瘤大小的影响 |
| 4.2.2 疫苗对小鼠肺转移的影响 |
| 4.2.3 荷瘤小鼠肿瘤组织病理学及免疫组织化学分析 |
| 4.2.4 小鼠生存期分析 |
| 4.3 黑色素瘤干细胞疫苗诱导抗肿瘤免疫机制的研究 |
| 4.3.1 疫苗促进小鼠骨髓来源的DCs成熟 |
| 4.3.2 疫苗增强DCs刺激CD8~+T细胞增殖的能力 |
| 4.3.3 疫苗增强DCs启动CD8~+T细胞的能力 |
| 4.3.4 疫苗对小鼠脾脏中CD8~+T细胞比例及活性的影响 |
| 4.3.5 疫苗降低CD8~+T细胞免疫检查点的表达 |
| 4.3.6 疫苗诱导脾脏CD8~+中心记忆性T细胞的形成 |
| 4.3.7 疫苗增加脾脏CD8~+T细胞抗肿瘤效应分子的表达 |
| 4.3.8 疫苗增强小鼠脾淋巴细胞的杀伤能力 |
| 4.3.9 疫苗降低荷瘤小鼠肿瘤组织细胞CD44和CD133的表达 |
| 4.3.10 疫苗对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞MHC I表达的影响 |
| 4.3.11 疫苗促进小鼠血清抗肿瘤细胞因子的分泌 |
| 4.3.12 疫苗增加小鼠肿瘤组织CD8~+T细胞的浸润 |
| 第5章 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）生物可降解高分子免疫植入器件用于结直肠癌术后免疫治疗研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 结直肠癌的流行病学 |
| 2.2 结直肠癌发生发展的机制 |
| 2.3 结直肠癌的诊查现状 |
| 2.4 结直肠癌的治疗现状 |
| 2.5 基于生物高分子材料的免疫治疗新策略 |
| 2.6 总结 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 化学及生物试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 实验试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞系及培养条件 |
| 3.2.2 动物实验 |
| 3.2.3 细胞复苏 |
| 3.2.4 细胞传代 |
| 3.2.5 细胞冻存 |
| 3.2.6 氧化葡聚糖(ODEX)的合成 |
| 3.2.7 4臂PEG-NH_2的合成 |
| 3.2.8 免疫植入器件的合成 |
| 3.2.9 植入器件的流变试验和拉伸试验 |
| 3.2.10 组织相容性实验和细胞毒性(MTT)实验 |
| 3.2.11 植入器件的体外和体内降解分析 |
| 3.2.12 免疫植入器件中R848和IgG的体外释放 |
| 3.2.13 体内抗肿瘤实验 |
| 3.2.14 外科手术和免疫植入器件的植入 |
| 3.2.15 肿瘤组织和血清中细胞因子分析 |
| 3.2.16 细胞流式分析 |
| 3.2.17 统计分析 |
| 第4章 结果 |
| 4.1 免疫植入器件的合成和表征 |
| 4.2 免疫植入器件用于术后免疫治疗效果 |
| 4.3 治疗后肿瘤免疫微环境分析 |
| 4.4 对远端肿瘤的抑制作用 |
| 第5章 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在攻读博士期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）免疫检查点抑制剂对乳腺癌的治疗效果观察（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 乳腺癌的危害及现状 |
| 1.2 乳腺癌的病因学探讨 |
| 1.2.1 导致乳腺癌的主要因素 |
| 1.2.2 发病机制 |
| 1.3 乳腺癌的分类、病理和分级 |
| 1.3.1 组织学分类 |
| 1.3.2 分级 |
| 1.4 乳腺癌的临床症状和相应检查 |
| 1.4.1 临床症状 |
| 1.4.2 辅助检查 |
| 1.5 乳腺癌的诊断 |
| 1.6 乳腺癌的综合治疗 |
| 1.6.1 手术治疗 |
| 1.6.2 化学药物治疗 |
| 1.6.3 内分泌治疗 |
| 1.6.4 放射治疗 |
| 1.6.5 生物靶向治疗 |
| 1.7 免疫疗法,乳腺癌治疗新思路 |
| 1.7.1 乳腺癌与人体免疫系统 |
| 1.7.2 乳腺癌的免疫治疗措施 |
| 1.8 免疫检查点阻滞剂在乳腺癌免疫治疗中的研究结果 |
| 1.8.1 免疫检查点和肿瘤免疫逃逸 |
| 1.8.2 靶向治疗CTLA-4 的免疫检查点抑制剂 |
| 1.8.3 用于PD-1/PD-L1靶向治疗的免疫检查点抑制剂 |
| 1.9 三阴性乳腺癌免疫治疗研究进展 |
| 1.9.1 乳腺癌的分子结构分析 |
| 1.9.2 TNBC主动免疫疗法 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 临床资料 |
| 2.1.1 病例来源 |
| 2.1.2 诊断标准 |
| 2.1.3 纳入标准 |
| 2.1.4 观察指标 |
| 2.1.5 评价标准 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 对照组行常规化疗方案 |
| 2.2.2 研究组行检查点抑制剂免疫治疗方案 |
| 2.2.3 患者血清免疫球蛋白水平的检测 |
| 2.2.4 统计学方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 观察三种免疫检查点抑制剂对乳腺癌的治疗效果 |
| 3.2 免疫检查点抑制剂相比于传统治疗对乳腺癌患者一般状态的影响 |
| 3.3 免疫检查点抑制剂与传统治疗前后血清免疫球蛋白水平比较 |
| 3.4 三种免疫检查点抑制剂对TNBC与非TNBC患者肿瘤大小的抑制作用 |
| 3.5 三种免疫检查点抑制剂对TNBC与非TNBC复发的影响 |
| 3.6 三种免疫检查点抑制剂治疗乳腺癌患者的药物不良反应情况 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 研究生期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）超声介导的物理损伤技术激活机体免疫在肿瘤治疗中的应用及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词 |
| 第一部分 肿瘤细胞裂解物联合IL-2通过激活机体免疫预防肿瘤发生的初步研究 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.黑色素瘤TCL的活性验证 |
| 2.预防性免疫TCL+IL-2对小鼠成瘤的影响 |
| 3.外周血及脾脏中淋巴细胞的动态改变 |
| 4.肿瘤组织浸润免疫细胞的表达情况 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 超声联合纳米粒的物理治疗方式在乳腺癌中的应用及免疫机制探索 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.LIP-PFH纳米粒的表观特征及理化特性 |
| 2.4T1细胞对LIP-PFH纳米粒的吞噬作用 |
| 3.LIFU介导LIP-PFH纳米粒发生相变的条件摸索 |
| 4.LIFU联合LIP-PFH纳米粒的物理治疗技术在体内外的抑瘤作用 |
| 5.LIFU联合LIP-PFH纳米粒治疗后机体T细胞免疫的改变 |
| 6.LIFU联合LIP-PFH纳米粒的物理治疗手段激活免疫的机制研究 |
| 7.LIFU联合LIP-PFH纳米粒的治疗后免疫抑制微环境的探索性分析 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 基金资助 |
| 博士期间发表的和待发表的论文 |
| 文献综述 超声物理损伤技术介导肿瘤免疫治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）肿瘤免疫治疗及其药物研发进展（论文提纲范文）
| 1 肿瘤免疫逃逸机制 |
| 2 肿瘤免疫治疗策略 |
| 2.1 细胞因子类免疫疗法 |
| 2.2 抗体类免疫疗法 |
| 2.2.1 治疗性单克隆抗体 |
| 2.2.2 免疫抑制细胞MDSCs和Treg单克隆抗体 |
| 2.2.3 免疫检查点抑制剂单克隆抗体 |
| 2.3 细胞免疫疗法 |
| 2.3.1 嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）免疫疗法 |
| 2.3.2 嵌合抗原受体NK细胞（CAR-NK）免疫疗法 |
| 2.4 肿瘤疫苗免疫疗法 |
| 2.5 溶瘤病毒免疫疗法 |
| 3 肿瘤免疫治疗药物研发现状 |
| 4 结论与展望 |
（9）个体化治疗性肿瘤疫苗的临床前药效学研究进展（论文提纲范文）
| 1 肿瘤抗原和肿瘤疫苗的分类及特点 |
| 1.1 肿瘤抗原的分类及特点 |
| 1.2 肿瘤疫苗的分类及特点 |
| 2 个体化治疗性肿瘤疫苗的作用机制及影响因素 |
| 3 个体化治疗性肿瘤疫苗的临床前药效学研究进展 |
| 3.1 肽疫苗 |
| 3.2 细胞疫苗 |
| 3.3 核酸疫苗 |
| 3.4 病毒载体疫苗 |
| 4 小结 |
（10）协同功能微泡构建及其在非小细胞肺癌治疗中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩略词注释表 |
| 绪论 |
| 文献综述一 具有免疫治疗作用的协同功能微泡研究进展 |
| 文献综述二 微波消融在肺癌的治疗中的研究进展 |
| 第一部分 协同功能微泡构建及其对非小细胞肺癌细胞的作用及其机制 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 讨论 |
| 第二部分 载多西他赛和anti-PD-L1 mAb的协同功能微泡在超声下协同治疗非小细胞肺癌 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第三部分 载多西他赛、Bindarit和anti-PD-L1 mAb的协同功能微泡治疗肺癌微波消融残余灶 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
四、肿瘤疫苗和肿瘤的免疫治疗（论文参考文献）
- [1]个性化新抗原肿瘤疫苗：道阻且长，未来可期[J]. 虞淦军,吴艳峰,曹雪涛. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2022(01)
- [2]基于专利分析的肿瘤疫苗领域技术创新态势研究[J]. 张婷,陈娟,欧阳昭连. 中国新药杂志, 2021(17)
- [3]M1型巨噬细胞外泌体疫苗通过调节肿瘤微环境增强肿瘤免疫治疗作用[D]. 吕芳芳. 河北大学, 2021(09)
- [4]IL-33修饰的黑色素瘤干细胞疫苗抗肿瘤及免疫机制研究[D]. 尹起亮. 吉林大学, 2021
- [5]生物可降解高分子免疫植入器件用于结直肠癌术后免疫治疗研究[D]. 吉国锋. 吉林大学, 2021(01)
- [6]免疫检查点抑制剂对乳腺癌的治疗效果观察[D]. 鹿瑶. 吉林大学, 2021(01)
- [7]超声介导的物理损伤技术激活机体免疫在肿瘤治疗中的应用及机制研究[D]. 司怡然. 北京协和医学院, 2021
- [8]肿瘤免疫治疗及其药物研发进展[J]. 邢续扬,王孝春,何伟. 中国药科大学学报, 2021(01)
- [9]个体化治疗性肿瘤疫苗的临床前药效学研究进展[J]. 贺庆,高华,王军志. 中国新药杂志, 2020(21)
- [10]协同功能微泡构建及其在非小细胞肺癌治疗中的应用[D]. 李田宽. 东南大学, 2020(02)